昆虫病原线虫(Entomopathogenic nematodes,EPNs)是一种体内携带共生菌的昆虫寄生性线虫,其作为一类抗虫谱广、杀虫效率高,对环境友好的生物防治因子,一直受到广泛的关注和研究。崇明拟异小杆(Heterorhabditidoides chongmingensis)线虫是小杆科中与嗜线虫沙雷氏茵(Serratia nematodiphila)共生的EPN。对其模式品系DZ0503CMFT(DZ)的研究发现,当跟非自生共生菌共培养时,其生长发育的恢复能力和致病力等方面都存在明显的削弱。为了深入解析这种现象产生的调控机制,前期研究通过Illumina HiSeqTM 2000高通量测序平台,构建了 DZ/S1和DZ/186两种单菌线虫组合的数字基因表达谱(DGE)文库;通过对DGE文库的分析,发现两种单菌组合的DZ线虫体内共10,000个左右与线虫生长发育密切相关的基因存在显著的差异表达。为了进一步探究这些差异表达基因对DZ线虫生长发育的调控机制,本研究选取DZ线虫差异表达基因中与秀丽隐杆线虫(Caenorhabdus elegans)daf-36基因同源的dz-daf 36基因进行研究。通过DZ/S1单菌组合的cDNA模板扩增得到dz-daf-36全序列,将获得的序列跟转录组测序获得序列进行比对,进一步通过分析获得dz-daf-36基因的开放阅读框(ORF)。对DZ-DAF-36蛋白进行生物信息学分析和系统发生关系分析。结果表明,dz-daf-36序列正确无突变,含有一个保守的Rieske结构域;DZ-DAF-36蛋白是一种亲水性的稳定蛋白,等电点为6.78,含有5个α螺旋和22个β折叠,并预测到其稳定的3D结构模型;在进化地位上DZ-DAF-36蛋白与寄生性线虫的相关蛋白同源。通过同源性分析选取dz-daf-36基因中特异性片段作为干扰片段,首先构建干扰片段的克隆载体,再利用L4440质粒载体构建干扰片段的dsRNA表达载体,并转化到大肠杆菌HT115(DE3)中。经由饲喂法在DZ线虫体内进行dz-daf-36的RNAi,利用实时定量PCR检测RNAi干扰效果,并观察和统计dz-daf-36 RNAi型DZ线虫的表型变化。定量结果显示,RNAi后DZ线虫体内的dz-daf-36基因表达被显著敲低,相对于对照组最高降低56.65%。寿命统计显示,DZ线虫的平均寿命由野生型组和空载组的12.07 d和10.76 d降低为RNAi组的9.03 d,分别降低25.19%和16.03%。在产卵量、虫卵孵化率、幼虫发育率和雌雄比上各组没有显著差异,但干扰组的幼虫滞育率增加5.93%。干扰组的幼虫生长速度显著慢于空载组和野生组,需要48 h发育到成虫,但各组成虫体长无明显差异。以上结果表明,我们成功获得了dz-daf-36基因序列,对其编码蛋白的相关理化特性和生物学特性进行了初步分析,并通过RNAi方法初步验证了dz-daf-36基因对DZ线虫的生物学功能,这对研究DZ或者其它EPNs基因调控机制提供了参考。