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尿酸酶分解嘌呤代谢最终产物尿酸，生成水溶性更强，更易分解的尿囊素。当尿酸在血液中沉积，引起肾衰竭以及痛风等疾病。尿酸酶针对禁忌常规治疗和常规疗法无效的患者，能快速降低血液中尿酸盐的含量。但作为外源蛋白有较高抗原性，影响了尿酸酶的活性。需要在尿酸酶分子表面结合一种水溶性高聚物，从而降低尿酸酶的抗原性，延长它在体内的半衰期。蛋白质PEG修饰技术在过去的20年中得到了快速发展，已有多篇文献报道了经PEG修饰的蛋白质药物降低了免疫原性、提高了稳定性、延长了半衰期，并用于临床治疗各种疾病。本文研究尿酸酶聚乙二醇修饰的条件、纯化方法以及修饰产物生物学活性和酶动力学性质的改变。通过对温度、pH、尿酸酶浓度、PEG和尿酸酶质量比等条件的筛选，确定pH8.5，4℃，尿酸酶与PEG2-NHS质量比1：10，尿酸酶浓度2mg／mL为最佳修饰条件，10min内反应完全。凝胶过滤层析测定尿酸酶分子量为70kD，结合还原和非还原性SDS-PAGE判断尿酸酶由两条分子量30kD的亚基通过二硫键组合而成。制备型PAGE电泳分离纯化后，尿酸酶和PEG-尿酸酶通过SDS-PAGE电泳检测均为单一条带。收集凝胶，回收反应混合液总活性的46.7％，目标产物130kD的PEG-尿酸酶占12％。尿酸酶最适温度和pH分别为40℃、pH8.5，经PEG修饰后，最适温度和pH变为35℃、pH8.0。修饰前后的尿酸酶在pH7.5-9.0范围内，温度40℃以下都比较稳定，PEG-尿酸酶在各个pH范围内都比尿酸酶相对稳定，修饰后尿酸酶的热稳定性也有所提高。在最适条件下，测定尿酸酶和PEG-尿酸酶Km分别为16.62×10-5mol／L、17.8×10-5mol／L。测定了尿酸酶和PEG-尿酸酶Km随pH、温度改变的变化情况，Km均高于最适条件得出的结果。采用TNBS法测定尿酸酶的氨基修饰率为16.7％。修饰后的PEG-尿酸酶抗胰蛋白酶水解能力明显高于未修饰的尿酸酶，在胰蛋白酶作用40min后仍保留原活性的20％，而尿酸酶在胰蛋白酶作用30min后活性就完全丧失。