论文部分内容阅读
目的：检测iASPP和CDKL1在癌组织中的表达，探索它们在癌症发生、发展中的作用，用以指导临床肿瘤诊断与治疗。方法：分别用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和Western blot方法检测56例卵巢癌患者的癌组织及对应的癌旁组织中iASPP (inhibitor of ASPPfamily)mRNA和蛋白表达水平，并用受试者工作特征曲线(Receiver operatingcharacteristic curve，ROC曲线)分析iASPP mRNA表达水平对卵巢癌的诊断价值；以人类卵巢癌细胞株OVCA420为研究对象，用siRNA干扰的方法使iASPP表达降低，用RT-PCR和Western blot方法检测转染效果；进行细胞功能学检测，观察转染后细胞的体外生长情况，CCK-8试验检测细胞增殖水平，Hoechst33342染色检测细胞凋亡水平。RT-PCR方法检测186例乳腺癌组织与98例乳腺良性肿瘤组织中CDKL1mRNA表达水平。免疫组织化学染色方法检测30例石蜡包埋乳腺癌组织中CDKL1蛋白表达水平。用CDKL1特异性短发夹RNA(shorthairpin RNA, shRNA)抑制乳腺癌细胞MCF-7中CDKL1基因表达，检测CDKL1对细胞增殖的影响及转染后细胞对化疗药物敏感性的改变。结果：卵巢癌组织中iASPP mRNA和蛋白水平都明显高于癌旁组织(P=0.001)；针对iASPP的特异性siRNA转入卵巢癌细胞OVCA420后，经RT-PCR和Westernblot检测，与空白对照相比，iASPP表达均明显降低；CCK-8实验结果显示iASPP基因沉默后细胞增值水平降低(P<0.05)，而Hoechst33342染色结果则显示干扰iASPP基因表达后，细胞凋亡增强。CDKL1在乳腺癌组织中表达高与良性对照组织，表达阳性率为77%(144/186)，临床资料分析显示，CDKL1在组织中表达阳性率高于与ER, PR, P53, VEGF和E-cad表达(P<0.05)。细胞实验结果显示，用shRNA抑制CDKL1表达后，MCF-7细胞生长抑制在G2/M期，且对细胞周期特异性化疗药物敏感性增强。结论：iASPP及CDKL1都在癌组织中高表达显示其在肿瘤发生过程中发挥重要作用，且具有一定诊断价值；而RNA干扰(RNAi)方法使这两个基因表达沉默后，抑制细胞生长，说明iASPP和CDKL1可作为肿瘤基因治疗的有效靶点。