论文部分内容阅读
第一部分 骨骼肌特异性敲除FGF9小鼠模型建立 目的：FGF9在多种生物学过程中起着重要作用，然而目前关于其在骨骼肌中的作用以及机制研究甚少。 因此，本实验我们利用Cre-Loxp技术，建立骨骼肌内特异性敲除FGF9的动物模型，从而为进一步研究FGF9在骨骼肌中的作用及其机制奠定基础。 方法： 利用Cre-loxp技术最终得到FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠，然后病理切片进行免疫荧光染色。 结果： 1.基因鉴定出FGF9flox/wt/Cre(+)小鼠； 2.基因鉴定出FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠； 3.免疫荧光证实骨骼肌中已特异性敲除了FGF9。 结论： 成功的建立了骨骼肌特异性敲除FGF9小鼠模型 第二部分 骨骼肌特异性敲除FGF9小鼠模型初步分析及其在骨骼肌损伤中的作用研究 目的：骨骼肌的损伤修复过程中主要是依靠肌卫星细胞的激活、增殖、分化成熟，同时还需要炎症巨噬细胞以及大量细胞因子（如FGF9）的参与。 实验首先对FGF9flox/floxCre(+)小鼠进行初步病理分析，然后制作骨骼肌损伤模型，进一步研究FGF9在骨骼肌损中的作用及机制。 方法： 1.初步分析FGF9flox/floxCre(+)的病理特点。 2.利用布比卡因建立小鼠骨骼肌损伤模型。 3.肌力测试。 4.对冰冻切片行HE染色、马松染色、免疫荧光。 5.组织学参数的定量评估。 结果： 1 FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠组相比于FGF9flox/flox小鼠组在体重、肌细胞直径和面积的大小之间无统计学意义（P＞0.05），两者在常规病理染色上无区别。 2骨骼肌损伤的研究 2.1 HE染色 在损伤的3d，5d，7d时FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠组相比于FGF9flox/flox小鼠组，坏死严重而再生能力弱（P＜0.05）。 2.2胫前肌肌力测试情况 FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠组相比于FGF9flox/flox小鼠组在骨骼肌损伤3d，5d，7d，肌力小（P＜0.05），到损伤14d的时候两者肌力接近（P＞0.05）。2.3骨骼肌损伤纤维化情况 同时期FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠组相比于FGF9flox/flox小鼠组的纤维化面积占总体面积少（P＜0.01）。 2.4骨骼肌损伤后的巨噬细胞免疫荧光 在骨骼肌损伤的3d，5d，7d可见FGF9flox/flox/Cre(+)小鼠组相比于FGF9flox/flox小鼠组的CD68阳性细胞多，CD206阳性细胞少（P＜0.05），在14d、28d两者阳性细胞数接近（P＞0.05）。 结论： 1.骨骼肌特异性敲除FGF9小鼠模型与正常小鼠无改变。 2.FGF9能够起到抗坏死和促再生的作用。 3.FGF9能够通过减少CD68阳性M1型巨噬细胞和增加CD206阳性M2型巨噬细胞来参与骨骼肌的损伤修复。 4.敲除FGF9能够减少纤维化。