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目的:选择摄食的主要因素是源于摄入后引起愉悦感,通过摄食建立味觉感受,并积累味觉经验,即通过摄食奖赏机制促进进食。有研究报道,摄食偏好涉及多巴胺能系统,多巴胺(Dopamine,DA)可通过D1样受体参与甜类食物形成的条件性摄食偏好调控。近期有文献报道,ghrelin,一个内源性生长激素促分泌素受体的天然配体,也参与调节摄食奖励,ghrelin可通过与中脑边缘系统多巴胺能神经元相互作用调节摄食的情绪和动机。近期研究发现,学习记忆中枢海马(Hippocampus,Hi)也与摄食选择及条件性摄食行为有关,且海马CA1区有丰富的ghrelin受体(growthhormone secretagogue receptor,GHS-R)表达。但目前海马ghrelin或GHS-R信号通路对可口食物偏好调控,尤其是对条件性摄食行为的影响,以及与DA受体信号关系研究未见报道。因此,本研究采用荧光免疫组化染色、核团微量注射,以及摄食行为学等研究方法,探讨海马CA1区ghrelin对大鼠条件性摄食偏好的影响及潜在机制。方法:1.选取5只成年雄性Wistar大鼠,采用荧光免疫组织化学染色法,观察大鼠海马内DA-D1R和ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor 1a,GHS-R1a)的表达;2.采用摄食分析实验方法,观察海马CA1区微量注射ghrelin及其受体拮抗剂对大鼠可口食物摄取的条件性位置偏好的影响:随机选取大鼠42只,分为6组(n=7):(1)生理盐水组(NS组):海马CA1区注射NS 0.5μl;(2)ghrelin组:海马CA1区注射1.0 nM ghrelin 0.5μl;(3)[D-LYS3]-GHRP-6组;海马CA1区注射20.0 nMGHS-R1a拮抗剂[D-LYS3]-GHRP-6 0.5μl;(4)SCH-23390组:海马CA1区注射12 nM DA-D1R拮抗剂SCH-23390 0.5μl;(5)[D-LYS3]-GHRP-6+ghrelin组:海马CA1区注射20.0 nM[D-LYS3]-GHRP-6/2.5μl+1.0 nM ghrelin/2.5μl混合液;(6)SCH-23390+ghrelin组:海马CA1区注射12 nM SCH-23390/2.5μl+1.0 nM ghrelin/2.5μl混合液。海马CA1区注射药物后立即观察大鼠0-2h普通饲料、脂肪颗粒或糖精颗粒摄入量;3.可口食物诱导条件性位置偏好(Conditional position preference,CPP)模型大鼠构建;将大鼠置于CPP操作箱(内分为白色和黑色区域),通过摄像头记录大鼠活动,筛选出在白色或黑色区域活动时间相近的大鼠,并单笼饲养。训练第1天,放上CPP操作箱中间隔板,将大鼠限制于白色区域,提供1 g糖精颗粒或1g脂肪颗粒,待大鼠适应并自由活动后放回饲养鼠笼;训练第2天,放上中间隔板,将大鼠限制在黑色适应区,给予1 g标准鼠粮,待大鼠适应并自由活动后放回饲养鼠笼。随后连续10天每天将大鼠交替放入白色或黑色区域,确保大鼠相邻两天处于不同区域接受CPP训练。训练期间确保CPP操作箱内光线、位置、训练时长等因素不变。10天后,对大鼠进行偏好测试;4.海马CA1区微量注射ghrelin对大鼠CPP的影响:CPP训练结束后,选取已CPP训练大鼠42只,随机分为6组(n=7):(1)NS组;(2)ghrelin组;(3)[D-LYS3]-GHRP-6 组;(4)SCH-23390 组;(5)[D-LYS3]-GHRP-6+ghrelin 组;(6)SCH-23390+ghrelin组。上述各组大鼠海马CA1区注药,注药后15 min进行CPP测试,观察大鼠海马CA1区注射ghrelin等药物对大鼠CPP的影响。结果:1.荧光免疫组化研究显示,在海马CA1区有呈红色荧光的GHS-R1a免疫阳性神经元,以及呈绿色荧光的DA-D1R免疫阳性神经元,并且GHS-R1a免疫阳性神经元与DA-D1R共存。提示,海马可能是ghrelin或DA的作用靶点之一。2.海马CA1区微量注射ghrelin对大鼠0-2 h标准鼠粮摄食量的影响结果显示,与NS组相比,海马CA1区微量注射ghrelin(1.0nM),大鼠0-2h标准鼠粮累计摄食量明显增高(P<0.05)。与ghrelin组相比,海马CA1区注射ghrelin+[D-LYS3]-GHRP-6混合液(P<0.01)或ghrelin+SCH-23390(P<0.05)混合液,ghrelin促大鼠摄食效应可被阻断或减弱(P<0.05)。但单独海马CA1区注射[D-LYS3]-GHRP-6或SCH-23390,大鼠0-2h摄食量无显著改变(P>0.05)。提示,海马CA1区外源性ghrelin可促进大鼠普通食物的摄入量,该效应可能与GHS-R1a信号系统的激活有关,DA-D1R信号通路可能也参与了该过程调控。3.海马CA1区微量注射ghrelin对大鼠0-2 h脂肪颗粒摄食量的影响结果显示,与NS组相比,海马CA1区微量注射ghrelin,大鼠0-2h脂肪颗粒摄入量明显增高(P<0.05);与ghrelin组相比,若海马CA1区注射ghrelin+[D-LYS3]-GHRP-6(P<0.01)或ghrelin+SCH-23390(P<0.05)混合液,ghrelin促大鼠脂肪颗粒摄入效应可被阻断或减弱。单独海马CA1区注射[D-LYS3]-GHRP-6或SCH-23390,大鼠0-2h脂肪颗粒摄入量无显著改变(P>0.05)。提示,海马CA1区外源性ghrelin可促进大鼠脂肪颗粒摄入量,该效应可能与GHS-R1a信号系统的激活有关,DA-D1R信号通路可能也参与了该过程调控。4.海马CA1区微量注射ghrelin对大鼠0-2 h糖精颗粒摄取量的影响结果显示,与NS对照组相比,海马CA1区微量注射ghrelin,大鼠0-2h糖精颗粒摄入量也明显增高(P<0.05);与ghrelin组相比,海马CA1区注射ghrelin+[D-LYS3]-GHRP-6混合液(P<0.01)或ghrelin+SCH-23390(P<0.05)混合液,ghrelin促大鼠糖精颗粒摄入效应可被阻断或减弱。单独海马CA1区注射[D-LYS3]-GHRP-6或SCH-23390,大鼠0-2h糖精颗粒摄入量无显著改变(P>0.05)。提示,海马CA1区ghrelin可促进大鼠糖精颗粒摄入量,该效应可能主要通过GHS-R1a信号通路实现的,DA-D1R信号通路也参与了调控过程。5.Ghrelin促大鼠普通饲料、脂肪或糖精颗粒摄入增长率(%)的差异分析结果显示,与普通饲料摄入量相比,海马CA1区注射ghrelin促0-2h脂肪颗粒(P<0.05)或糖精颗粒(P<0.05)摄食增长率显著增加。但ghrelin促脂肪颗粒与促糖精颗粒摄入增加百分比无显著差异(P>0.05)。提示,ghrelin促大鼠可口食物的摄入效应更为显著。6.Ghrelin对大鼠糖精颗粒饮食条件性位置偏好的影响研究显示,与NS组相比,海马CA1区微量注射ghrelin,大鼠在CPP操作箱有糖精区域(白色区域)停留时间明显延长(P<0.01);若海马CA1区注射ghrelin+[D-LYS3]-GHRP-6混合液(P<0.01)或ghrelin+SCH-23390(P<0.05)混合液,ghrelin诱导的大鼠在糖精区域停留时间延长效应可明显减少。但单独海马CA1区注射[D-LYS3]-GHRP-6或SCH-23390,大鼠在有糖精区或无糖精区域停留时间无显著差异(P>0.05)。提示,海马CA1区ghrelin可促进大鼠饮食条件性位置偏好,即增强了糖精诱发的享乐效应,该效应与GHS-R1a信号通路激活有关,DA-D1R信号通路可能也参与了该过程调控。7.Ghrelin对大鼠脂肪颗粒食物条件性位置偏好的影响研究显示,海马CA1区微量注射ghrelin,大鼠在CPP操作箱内有脂肪颗粒的区域(白色区域)停留时间明显延长(P<0.01);若海马CA1区注射ghrelin+[D-LYS3]-GHRP-6混合液(P<0.01)或ghrelin+SCH-23390(P<0.05)混合液,ghrelin诱导的大鼠在有脂肪颗粒食物区域停留时间延长的效应可被明显减弱。但单独海马CA1区注射[D-LYS3]-GHRP-6或SCH-23390,大鼠在有脂肪颗粒区或无脂肪颗粒区域停留时间无显著差异(P>0.05)。提示,海马CA1区ghrelin可促进大鼠可口食物条件性位置偏好,即增强了脂肪诱发的享乐效应,该效应与GHS-R1a信号通路激活有关,DA-D1R信号通路可能也参与了该过程调控。8.Ghrelin促大鼠在有脂肪或糖精颗粒的CPP操作箱白色区域内停留时长结果分析显示,ghrelin促大鼠在有脂肪或糖精可口食物区域停留时长增长率(94.9%vs.96.2%)无明显差异(P>0.05)。结论:大鼠海马CA1区有Ghrelin和DA作用位点;海马CA1区外源性ghrelin可促进大鼠0-2h普通饲料、脂肪颗粒或糖精颗粒摄入量,并且大鼠对可口食物更为偏好;脂肪颗粒或糖精颗粒可诱导大鼠产生可口食物条件性位置偏好,海马CA1区外源性ghrelin可加强该享乐效应,GHS-R1a或DA-D1R信号通路可能也参与了该过程调控。