星形胶质细胞在神经系统中广泛存在,并与神经元以及其他胶质细胞共同构成中枢神经系统。星形胶质细胞除填充以及营养神经元的作用外,亦在神经系统的发育以及修复中也占有一席之地。急性脊髓损伤(ASCI)发生后,除直接暴力所带来的原发性损伤外,多数患者在数天内将发生继发性脊髓损伤(SSCI)。原发性损伤是外力直接作用所带来的直接性物理伤害,同其他意外伤害一样无直接有效的方法可以针对损伤进行治疗;继发性脊髓损伤是直接性损伤发生后,一段时间之内因为身体免疫系统对损伤组织激活,所导致的以细胞炎性反应损伤,并最终导致直接损伤部位的加重以及范围扩大。现有的资料表明,急性脊髓损伤中,最终要的病理生理变化是因为炎性因子所导致的细胞自我凋亡,这也是急性脊髓损伤中组织损伤较原发性损伤扩大并加重的重要机制。趋化因子(chemotactic factor)是一类具有促炎和迁移作用的小分子物质。通常在炎症反应中作为免疫细胞的化学诱导物,引导免疫细胞到达炎性反应区域发挥吞噬作用。趋化因子及其受体在中枢神经系统中广泛表达,对于干细胞的迁移、轴突的生长和神经传导的调节有重要作用。例如SCI后给予XCL-10封闭抗体进行治疗可以显著降低炎症反应,增强功能的恢复、组织和神经元轴突再生。如,有研究发现,外周神经损伤后,CXCL-12(又称MIP-2)可以通过促进中枢神经系统髓鞘的生成以及神经突的生长,增强SCI后轴突再生和重建。微小RNA(Micro-RNA或mi RNA)是一类小型非编码RNA分子,可通过碱基互补配对与靶基因的3’非翻译区(3’-ntranslated region,3’-UTR)结合而进而调控编码基因的表达。大量研究表明,mi RNAs可广泛参与肿瘤形成、免疫性疾病等几乎多种疾病的病理过程。mi R-136为mi RNA家族成员之一,在以往研究中发现,mi R-136在非小细胞癌中较其他组织表达量出现上调,上调程度与肿瘤的恶性程度及是否容易发生转移密切相关。另有研究指出mi R-136可通过下调通道蛋白Smad2和Smad3抑制肺腺癌细胞的转移与侵袭,并通过下调星形胶质细胞抑制胶质瘤细胞的凋亡。A20通常也被称为TNF-α诱导蛋白3(TNFAIP3)或锌指蛋白3,可以在内皮细胞受到TNF-α刺激后产生。A20的保护作用在天然免疫、继发性免疫中均表现出明显效果,部分研究也指出A20具有抑制B细胞肿瘤的发生。另外,A20是终止激活后的NF-κB关键蛋白,并由一些受体如TNF受体、Toll样受体、核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2的等调节。敲除A20的大鼠体内IKK活性会病态增加使NF-κB信号通路不受控制,最终因多器官炎症反应衰竭以及组织损伤而死亡。作为一种调控蛋白,A20缺失也会导致TLR信号传导的异常并加重机体自身炎症反应的程度。本实验研究白介素17(IL-17)刺激大鼠脊髓星形胶质细胞产生炎性因子,以及A20蛋白的变化;沉默大鼠星形胶质细胞中mi R-136-5p基因的表达,IL-17诱导的大鼠星形胶质细胞炎症反应中A20蛋白变化。为急性脊髓损伤的临床治疗提供理论依据和新方法。目的:探讨A20炎症抑制蛋白在炎症因子IL-17诱导大鼠星形胶质细胞炎症反应中于mi R-136-5p被抑制前后的产量变化。方法:(1)体外分离以及培养大鼠星形胶质细胞;(2)使用不同浓度的IL-17(10、20、50、100、200ng/ml)对获得的大鼠星形胶质细胞刺激12h;(3)使用上一步中获知的最适浓度,刺激不同时间点(3h、6h、12h、24h和48h)的大鼠星形胶质细胞;(4)通过q PCR以及ELISA的方法分别检测IL-17刺激之后大鼠星形胶质细胞炎症因子(IL-6、TNF-α、MIP-2、MCP-1、MCP-5)的改变情况。(5)对星形胶质细胞进行最适浓度、最适时间的刺激,并通过q PCR以及WB方法分别测量其A20的m RNA以及蛋白表达水平。(6)沉默大鼠星形胶质细胞mi R-136-5p的基因表达;然后予IL-17刺激并q PCR测定mi R-136-5p基因水平表达,WB方法检测大鼠星形胶质细胞的A20蛋白表达水平。结果:实验组大鼠星形胶质细胞受IL-17刺激后,A20蛋白在6h时表达量显著减少(p<0.05),至12h时至峰值,但是与6h相比变化无统计学差异;IL-17诱导下,与空白对照组(blank)以及阴性转染组(control)比较,mi R-136-5p基因沉默组中A20的表达量显著性的增加。结论:大鼠星形胶质细胞A20的表达量相关炎症因子变化在峰值的表达量上出现了负相关性,A20炎症负调控蛋白在大鼠星形胶质细胞炎症发挥调控作用。沉默大鼠星形胶质细胞mi R-136-5p的表达之后再次进行IL-17刺激,表明mi R-136-5p与A20之间存在着负性调控作用。因此,IL-17诱导的大鼠星形胶质细胞炎症中,沉默mi R-136-5p通过上调锌指蛋白A20发挥抗炎作用。