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目的:观察补肾生髓方药济生肾气汤联合恩替卡韦治疗脾肾阳虚证乙型肝炎肝硬化患者的临床疗效、安全性以及对患者肝功能、骨髓造血的影响,并进一步观察济生肾气汤联合骨髓间充质干细胞移植治疗对肝硬化大鼠作用的分子机制,探讨补肾生髓方药济生肾气汤对促进干细胞迁移、改善肝功能的中医理论依据与现代分子生物学机制的关联性。方法:(1)临床研究:将符合纳入标准的64例脾肾阳虚证乙型肝炎肝硬化患者,按数字随机表法随机分为治疗组32例,对照组32例。其中对照组予恩替卡韦分散片治疗,治疗组予恩替卡韦分散片联合济生肾气汤治疗,疗程均为3个月。疗程结束后观察2组患者治疗前后临床症状评分、肝功能、血常规、血清促红细胞生成素的变化情况及不良反应。(2)动物实验:将77只健康SPF级SD大鼠随机分出3只大鼠用于处死后取材骨髓间充质干细胞进行细胞培养,10只大鼠作为正常组,其余大鼠采用四氯化碳联合乙醇、高脂饮食的复合因素造模方法,共诱导8W复制肝硬化大鼠模型。造模成功后将其分为模型组、单用BMSCs移植组、单用中药组、BMSCs移植+中药高剂量组、BMSCs移植+中药中剂量组、BMSCs移植+中药低剂量组。空白组予蒸馏水灌胃;模型组不给予任何干预;单用BMSCs移植组予BMSCs移植;单用中药组予“济生肾气汤”混悬液中剂量灌胃;BMSCs移植+中药高剂量组予BMSCs移植并“济生肾气汤”混悬液高剂量灌胃;BMSCs移植+中药中剂量组予BMSCs移植并“济生肾气汤”混悬液中剂量灌胃;BMSCs移植+中药低剂量组予BMSCs移植并“济生肾气汤”混悬液低剂量灌胃,中药灌胃均为每日1次,BMSCs移植为每周1次,从第8W末起,连续4W,至12W末。疗程结束后,观察干预后7组大鼠肝脏组织病理学情况;运用全自动生化分析仪测定各组大鼠肝功能(ALT、AST、ALB、TBIL);ELISA法检测各组大鼠外周血EPO、GCSF、IL-3、IL-6、HGF、SCF水平;Western blot法检测各组大鼠肝组织中SDF-l、CXCR4蛋白的表达。结果:(1)临床研究:实验过程因未按治疗方案服用药物、失访、患者因个人因素自动要求退出等原因剔除3例,最终实际有效病例为61例。疗程结束后,治疗组治疗后的临床症状评分、肝功能、血常规及血清促红细胞生成素较治疗前均有所改善(P<0.01),对照组治疗后的临床症状评分、肝功能、血常规较治疗前均有所改善(P<0.01),而对照组治疗后的血清促红细胞生成素较治疗前无明显差异(P>0.05);治疗组改善肝硬化患者的临床症状评分、肝功能、血常规及血清促红细胞生成素的效果优于对照组(P<0.01或P<0.05)。两组患者在实验过程中未出现毒副作用及不良反应。(2)动物实验:大鼠一般情况:经干预治疗后,单用BMSCs移植组、单用中药组、BMSCs移植+中药高剂量组、BMSCs移植+中药中剂量组及BMSCs移植+中药低剂量组的大鼠精神、营养、活动量等表现较干预治疗前均有不同程度的改善,其中BMSCs移植+中药高剂量组及BMSCs移植+中药中剂量组改善的效果最佳。各组大鼠肝组织HE染色变化:模型组肝组织病理呈重度纤维化,可见假小叶,肝细胞变性及坏死程度重,说明肝硬化造模成功。经过干预治疗后,各治疗组大鼠的肝组织纤维化、肝细胞变性及坏死均存在不同程度的改善,其中以BMSCs移植+中药高剂量组和BMSCs移植+中药中剂量组改善肝硬化大鼠肝组织纤维化、肝细胞变性及坏死的效果最佳,BMSCs移植+中药低剂量和单用BMSCs移植组效果次之,均优于单用中药组。各组大鼠肝功能:与空白组相比,模型组ALT、AST及TBIL水平显著升高、ALB水平显著下降(P<0.01);与模型组相比,各治疗组ALT、AST及TBIL水平均有不同程度下降,ALB水平均有不同程度升高(P<0.01);各治疗组相比,BMSCs移植+中药高剂量组与BMSCs移植+中药中剂量组降低ALT、AST效果相比,差异无统计学意义(P>0.05);BMSCs移植+中药高剂量组升高ALB、降低TBIL效果最佳,BMSCs移植+中药中剂量组次之(P<0.01)。各组大鼠外周血EPO、GCSF、IL-3、IL-6、HGF、SCF的变化:与空白组相比,模型组EPO、G-CSF、HGF、SCF及IL-3水平显著下降,IL-6水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,各治疗组EPO、G-CSF、HGF、SCF及IL-3水平均有不同程度升高,IL-6水平均有不同程度下降(P<0.01);各治疗组相比,BMSCs移植+中药高剂量组升高EPO及IL-3、降低IL-6效果最佳,BMSCs移植+中药中剂量组次之(P<0.01或P<0.05);而BMSCs移植+中药高剂量组升高G-CSF、HGF效果最佳(P<0.01),BMSCs移植+中药低剂量组与BMSCs移植+中药中剂量组升高G-CSF、HGF效果相比,差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠肝组织中SDF-l、CXCR4蛋白的表达:经干预治疗后,与模型组相比,各治疗组肝组织中SDF-l、CXCR4蛋白表达量均有不同程度升高(P<0.01);各治疗组相比,BMSCs移植+中药高剂量组及BMSCs移植+中药中剂量组肝组织中SDF-l、CXCR4蛋白表达量最高,BMSCs移植+中药低剂量组和单用BMSCs移植组次之,均高于单用中药组(P<0.01)。结论:临床研究表明,恩替卡韦联合济生肾气汤治疗脾肾阳虚证乙型肝炎肝硬化患者可明显改善其临床症状、肝功能、血常规,升高血清EPO水平,促进骨髓造血,疗效明显,安全可靠。动物实验表明,BMSCs移植联合济生肾气汤治疗可改善其肝功能、肝脏炎症反应、肝纤维化程度,促进骨髓造血及BMSCs的迁移,这可能通过上调SDF-l/CXCR4信号通路及促进信号通路下游因子EPO、SCF、G-CSF、HGF及IL-3分泌,抑制信号通路下游因子IL-6分泌有关,为我们今后应用中医药联合BMSCs移植治疗肝硬化的研究提供了前期基础。