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目的:通过检测胃腺癌(Gastricadenocarcinoma,GAC)和正常胃粘膜中膜联蛋白A10(annexin A10,ANXA10)、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达的强弱,分析ANXA10、MMP-9、VEGF三者之间的相关性及它们分别在胃腺癌与正常胃粘膜中表达的差异性和与临床病理因素(性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、组织学分级、浸润深度、有无区域淋巴结、有无远处转移和临床分期)的关系;初步探索ANXA10在胃腺癌发生、发展中的潜在作用,以及这些作用是否和已知的与胃腺癌浸润、转移相关的因子MMP-9及VEGF有相关性,从而为进一步研究ANXA00在胃腺癌中作用的分子机制打下基础。为胃腺癌的诊断、监测、风险评估、转移和复发预测以及靶向治疗等提供理论依据和理想靶点。
方法:收集2008年12月至2010年7月在南昌大学第一附属医院行胃癌手术的59例胃腺癌患者,每例患者的肿瘤直径、位置、肿瘤浸润深度、有无区域淋巴结及远处转移等均由术后病理证实,在一附院病理科查找对应患者的术后癌组织蜡块,同时每例均有距癌组织至少5cm以上的正常胃组织蜡块作为对比。所有病人按临床病理资料(性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、组织学分级、浸润深度、有无区域淋巴结转移、有无远处转移和临床分期)进行分组。患者术前均未行化疗、放疗或介入治疗。每位患者的组织蜡块均切4片,每片厚约4μm。采用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)二步法检测胃腺癌和正常胃组织标本中的ANXA10、MMP-9、VEGF表达情况,分析其表达差异、与临床病理因素(性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、组织学分级、浸润深度、有无区域淋巴结转移、有无远处转移和临床分期)的关系及其之间表达的相关性。使用SPSS15.0统计软件对数据进行分析处理,不同指标组之间分别进行卡方检验和列联相关性分析,p≤0.05为具有统计学意义,检测水准取双侧。
结果:
1.胃腺癌及正常胃粘膜中ANXA10、MMP-9、VEGF的IHC染色结果
(1)ANXA10定位于细胞核和细胞浆,以核为主。阳性细胞的细胞核出现棕褐色颗粒,胞浆内出现黄棕色颗粒,而阴性细胞的胞浆和胞核内出现少量淡黄色颗粒或者无黄棕色颗粒。部分细胞间质亦可见少量的棕黄色颗粒。
(2)MMP-9定位于细胞浆内,阳性细胞的胞浆内出现明显的黄、棕褐色颗粒,少数细胞核也出现黄棕色颗粒。阴性细胞的胞浆或者胞核中无黄棕色颗粒。部分细胞间质亦可见少量的黄棕色颗粒。
(3)VEGF定位于细胞浆内,阳性细胞的胞浆出现明显的黄、棕褐色颗粒,少数细胞核也出现黄棕色颗粒。阴性细胞的胞浆或者胞核中无黄棕色颗粒。部分细胞间质、血管内皮细胞可见少量的黄棕色颗粒。
2.ANXA10在胃腺癌及正常胃粘膜中的表达情况及与临床病理因素间的关系
ANXA10在59例胃腺癌中有35例表达,阳性率为59%(3.5/59);在配对的59例正常胃粘膜中有50例表达ANXA10,阳性率为85%(50/59),前者明显低于后者,P值=0.001,两组ANXA10表达有明显差异。胃腺癌中ANXA10表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置无相关(p>0.05),与组织学分级、浸润深度、有区域无淋巴结转移、有无远处转移和临床分期有相关(p<0.05)。
3.MMP-9在胃腺癌及正常胃粘膜中的表达情况及与临床病理因素间的关系
MMP-9在59例胃腺癌中有45例表达,阳性率为76%(45/59);在正常胃粘膜中有7例表达,阳性率为12%(7/59),前者明显高于后者,p<0.001,两者MMP-9表达有明显差异。MMP-9表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置无相关(p>0.05);与组织学分级、浸润深度、有无区域淋巴结转移、有无远处转移和临床分期有相关(p<0.05)。
4.VEGF在胃腺癌及正常胃粘膜中的表达情况及与临床病理因素间的关系
VEGF在胃腺癌中有37例表达,阳性率为63%(37/59);在正常胃粘膜中有5例表达,阳性率为8%(5/59),前者显著高于后者,p<0.001,两组VEGF表达有明显差异。VEGF表达与患者的性别、年龄、肿瘤位置、组织学分级、浸润深度无相关(p>0.05);与肿瘤直径、有无区域淋巴结转移、有无远处转移和临床分期有相关(p<0.05)。
5.在胃腺癌中,ANXA10、MMP-9、VEGF之间表达的相关性
ANXA10与MMP-9之间Pearson列联系数r=0.025,两者表达无相关(p=0.849); ANXA10与VEGF之间Pearson列联系数r=0.068,两者表达无相关(p=0.603);VEGF与MMP-9之间Pearson列联系数r=0.297,两者表达有相关(p=0.017)。
6.在正常胃粘膜中,ANXA10、MMP-9、VEGF之间表达的相关性
ANXA10与MMP-9之间Pearson列联系数r=0.135,两者表达无相关(p=0.297);ANXA10与VEGF之间Pearson列联系数r=0.040,两者表达无相关(p=0.758); VEGF与MMP-9之间Pearson列联系数r=0.256,两者表达有相关(p=0.042)。
结论:
1、ANXA10表达下调和失活是胃腺癌的重要特征之一,它的下调和失活可能对胃腺癌的发生、发展起促进作用;
2、ANXA10表达下调和失活可能是胃腺癌发生和其恶性程度高的重要因素之一;
3、ANXA10对胃腺癌发生、发展及其恶性程度的影响与MMP-9、VEGF无相关。
4、胃腺癌中MMP-9、VEGF高表达可能对胃腺癌发生、发展有促进作用,是其恶性程度高、侵袭性强的重要原因。