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目的选择蛋白是粘附分子家族中的一个小家族,根据分布部位不同分为E、P、L三个成员.选择蛋白家族分子为I型跨膜糖蛋白,其胞膜外区有较高同源性,均由三部分组成:氨基端:钙离子依赖的外源凝集素样结构域;紧临氨基端是表皮生长因子结构域;近膜端;补体调节蛋白结构域.三种选择蛋白基因均簇集在一号染色体长臂,长度约1.1Kb.三种选择蛋白分别在炎症反应的不同时期参与炎症细胞的聚集和渗出.E、P两种选择蛋白除在炎症反应中发挥作用外,还介导肿瘤细胞与血管内皮细胞、血小板的粘附,提示它们与肿瘤血道转移关系密切.L-选择蛋白除了参与炎症反应中白细胞的聚集,同时还在淋巴细胞归巢、炎症反应、肿瘤转移等生理病理过程中发挥重要作用.Fukuda MN等利用噬菌体展示技术得到能模拟L-选择蛋白糖配体的七肽(IELLQAR).已有实验证实:该七肽在体外能与基因重组L-选择蛋白结合,竞争性地抑制L-选择蛋白与寡糖配体的结合;在体内能一定程度上抑制炎症反应、肿瘤转移的发生,但这种寡糖模拟肽作为配体是否能与细胞表面L-选择蛋白结合,尚无实验证据.该研究利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜,观察这种寡糖模拟肽(IELLQAR)是否能与细胞表面L-选择蛋白结合,深入探讨这种寡糖模拟肽与细胞结合的特异性;同时,我们用寡糖模拟肽的方法对其他四种细胞株表面的L-选择蛋白表达情况进行鉴定,将这种方法与L-选择蛋白抗体的方法进行比较,建立了以寡糖模拟肽鉴定细胞表面分子一种新方法.方法寡糖模拟七肽生物素化后与细胞孵育,加入带荧光的卵白素(Avidin-FITC),表面有L-选择蛋白表达的细胞会带有FITC的绿色荧光,应用流式细胞仪检测细胞的荧光强度和荧光表达阳性率;应用荧光显微镜观察寡糖模拟七肽与细胞的结合.生物素化寡糖模拟七肽,Avidin-FITC和带荧光(PE)的L-选择蛋白抗体同时与淋巴细胞结合,激光共聚焦显微镜观察寡糖模拟七肽与淋巴细胞结合的特异性.结论1.氨基酸序列为IELLQAR多价的寡糖模拟肽可以与多种细胞表面的L-选择蛋白结合,而单价的寡糖模拟肽与细胞表面的L-选择蛋白结合很弱.2.多价的寡糖模拟肽与细胞表面L-选择蛋白的结合具有与抗体类似的特异性,因此它可能成为鉴定细胞表面分子的一种新方法.