研究目的:检测依鲁替尼对急性T淋巴细胞白血病细胞株CCRF-CEM的增殖,以及其凋亡的调控,探讨PI3K通路在依鲁替尼诱导白血病细胞凋亡中的作用。为临床治疗急性T淋巴细胞白血病提供新的治疗药物,扩大依鲁替尼的治疗范围。研究方法:1.细胞的增殖抑制率检测。使用不同浓度(0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100μmol/L)的依鲁替尼作用于CCRF-CEM(人急性T淋巴细胞白血病细胞)细胞株,分别作用24h、48h、72h后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,观察药物对CCRF-CEM细胞增殖的影响。2.倒置显微镜观察细胞在不同的药物浓度作用下形态学改变。3.设立不同浓度的依鲁替尼处理细胞后,采用Annexin V-FITC/PI荧光双染色测定细胞的凋亡率,观察依鲁替尼对CCRF-CEM的凋亡影响。荧光显微镜观察细胞形态学改变。4.用实时荧光定量PCR检测不同浓度依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,检测PTEN基因和BCL-2基因mRNA的表达变化,观察依鲁替尼对这些基因的影响。5.用依鲁替尼作用细胞后,使用Western blotting检测PTEN和BCL-2蛋白水平的表达变化,观察依鲁替尼对PTEN和BCL-2蛋白表达水平的改变。研究结果:1.不同浓度依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01)并且抑制率随药物浓度增高而增高。在同一浓度依鲁替尼作用细胞后,不同的作用时间,抑制率也有明显的变化(P<0.01),呈时间依懒性,但在低浓度下,72h细胞的增殖抑制率比48h低。2.依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,异形细胞增多,细胞多皱缩,破裂,核碎裂,固缩。3.依鲁替尼作用细胞后,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),并且呈药物浓度依赖性。4.用依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,PENT、BCL-2基因mRNA的表达明显增高(P<0.01),并有浓度依懒性。5.用依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,PENT、BCL-2在蛋白水平的表达明显增高(P<0.01)。结论:依鲁替尼可以作用于急性T淋巴细胞白血病,通过PI3K通路抑制白血病细胞增殖,诱导白血病细胞凋亡。依鲁替尼可能成为治疗急性T淋巴细胞白血病的新药物。