羊蹄超氧化物歧化酶(SOD)的提取、鉴定和简并PCR法获取SOD基因的初探

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超氧化物歧化酶(SOD)是超氧阴离子自由基的天然清除剂,在医学、化妆品、保健食品等领域应用十分广泛。羊蹄(Rumex japonicus Houtt.)是一种古老的中草药,因其在自然界中的分布广泛,抗氧化活性强而倍受关注。目前,在国内外未发现对羊蹄SOD进行提取和功能研究的报道,在三大基因数据库中也没有关于羊蹄SOD基因的信息。本研究首次从植物羊蹄的根中提取SOD,并对其理化性质和功能等进行了初步研究。实验结果表明从羊蹄根中提取的SOD浓度达到3.64mg/ml,活力为17592U,比活力为4833U/mg,分子量在35kD左右,研究证明羊蹄SOD对温度和PH值均有一定的耐受性。本研究首次设计了用于获取羊蹄SOD基因的简并引物,并利用简并PCR技术对从羊蹄植物叶片中获取SOD基因进行了尝试。实验结果表明改良CTAB法和试剂盒提取的羊蹄植物叶片总RNA满足逆转录要求。以MVKAVAVL和ACGIIGLQG作为保守氨基酸序列,设计了用于扩增羊蹄Cu/Zn-SOD的简并上游引物和下游引物,确定了用于获取羊蹄SOD基因的最适反应条件为。我们利用Vector NTI软件对NCBI的nr数据库中具有代表性的30种植物的Cu/Zn-SOD全长基因序列和氨基酸序列进行分析,得到了它们之间的进化关系树形图,发现了更为适合作为简并引物设计的参考区域。我们从羊蹄中提取了超氧化物歧化酶并对其进行了初步鉴定。虽然我们还没有获得羊蹄SOD的基因信息,但已经完成的研究工作为最终获取羊蹄SOD的编码基因,添补数据库内羊蹄SOD的基因信息奠定了基础。
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