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类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以慢性、进行性、对称性关节炎为主的一种全身性自身免疫性疾病。该病可导致关节破坏,畸形和功能障碍,甚至致残。其发病的病因尚不清楚,一般认为遗传、感染、环境等因素的共同作用是导致RA发病的主要原因。赤雹(Thladiantha dubia Bunge)又名赤瓟,赤包,气包,山屎瓜等,为葫芦科多年蔓生草本植物。赤雹根为该植物的干燥根,满族民间常用于跌打损伤,风湿痛等证,具有较好的疗效,且无明显毒副作用。赤雹根中主要含三萜皂苷类成分赤雹根总皂苷STDR。前期研究表明,赤雹根总皂苷对大鼠弗氏完全佐剂佐剂型关节炎具有治疗作用。第一部分赤雹根总皂苷对佐剂型关节炎大鼠组织损伤的治疗作用目的:通过观察STDR对鼠佐剂性关节炎(AA)大鼠足跖、滑膜的病理变化的影响以及对脾脏指数的影响,探讨赤雹根总皂苷(STDR)对大鼠AA的治疗作用。方法:1.分组与处理选取雄性SD大鼠80只,随机取10只作为正常对照组。其余大鼠右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂0.1ml建立大鼠AA模型,成模后随机分为正常对照组,模型组,STDR 40、80、160mg/kg/d剂量组和雷公藤多苷组(12mg/kg/d),每组10只。各用药组大鼠分别灌胃给予相应药物21d。2.大鼠足肿胀度及关节炎指数的测定分别于给药前及给药后5、9、13、17、21d测量各组大鼠左后足爪厚度,并计算其肿胀度;观察其关节肿胀程度,计算关节炎指数(AI)。3.大鼠足跖与膝关节滑膜炎症反应的病理学观察给药后第22d处死大鼠,取足跖炎症组织、膝关节滑膜;采用HE染色法观察足跖、膝关节滑膜的病理变化。4.大鼠脾脏指数的计算大鼠处死后取脾脏,称量脾脏重量,计算脾脏指数(SI)。结果:1.对大鼠足肿胀度及关节炎指数的影响模型组大鼠足肿胀度显著高于正常对照组(P<0.01);STDR高、中、低剂量组大鼠足跖肿胀度分别于给药5d、9d、13d开始明显下降,显著低于模型组(P<0.05);给药21d STDR各剂量组大鼠足跖肿胀度均显著低于模型组(P<0.01)。模型组大鼠AI值明显高于正常对照组(P<0.01);STDR 160mg/kg/d剂量组与TG组大鼠AI值于给药第9d显著低于模型组(P<0.05),STDR80、40mg/kg/d剂量组大鼠AI值于给药第13d显著低于模型组(P<0.05);给药21d STDR各剂量组大鼠足跖肿胀度均显著低于模型组(P<0.01)。2.对大鼠足跖炎症反应的影响正常对照组大鼠足跖肌肉组织细胞完整。模型组大鼠足跖肌肉完全坏死,有严重的炎性细胞浸润及纤维化,STDR中、高剂量组及TG组大鼠足跖炎症浸润明显减轻,STDR高剂量组及TG组大鼠足跖组织纤维化减轻,可见正常肌肉组织。3.对大鼠膝关节滑膜病化的影响正常对照组大鼠滑膜细胞为1层,滑膜下层为完整的结缔组织,血管数较少;模型组大鼠滑膜增生明显,有大量毛细血管增生及炎性细胞浸润;STDR低剂量组大鼠膝关节滑膜增生略轻于模型组,STDR中、高剂量组大鼠膝关节滑膜增生及炎症反应明显轻于模型组。4.对大鼠脾脏指数的影响模型组大鼠脾脏指数明显高于正常对照组(P<0.01);STDR中、高剂量组大鼠脾脏指数显著低于模型组(P<0.05或P<0.01);STDR低剂量组脾指数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:STDR对佐剂型关节炎大鼠足跖与关节的肿胀、足跖与滑膜的炎症性损伤及炎症引发的脾肿大有明显的抑制作用。第二部分赤雹根总皂苷对佐剂型关节炎大鼠足跖及脾脏中IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的影响目的:观察STDR对AA大鼠足跖、脾脏中TNF-α,IL-1β和IL-6表达水平的影响,探讨STDR治疗类风湿性关节炎的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法:1.RT-PCR法测定足跖TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的转录水平。2.免疫组化法测定足跖TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平。3.免疫组化法测定脾脏TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平。结果:1.STDR对AA大鼠足跖TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的转录水平的影响1.1对AA大鼠足跖TNF-αmRNA转录水平的影响模型组大鼠足跖TNF-αmRNA的表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖TNF-αmRNA的表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),STDR 160mg/kg/d剂量组大鼠足跖TNF-αmRNA的表达水平明显低于TG组及STDR 40mg/kg/d剂量组(P<0.05)。1.2对AA大鼠足跖IL-1βmRNA转录水平的影响模型组大鼠足跖IL-1βmRNA的表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖IL-1βmRNA的表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),STDR 160mg/kg/d剂量组大鼠足跖IL-1βmRNA的表达水平明显低于TG组及STDR 40mg/kg/d剂量组(P<0.05)。1.3对AA大鼠足跖IL-6 mRNA转录水平的影响模型组大鼠足跖IL-6 mRNA的表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖IL-6 mRNA的表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),STDR 160mg/kg/d剂量组大鼠足跖IL-6 mRNA的表达水平明显低于TG组及STDR 40mg/kg/d剂量组(P<0.05)。2.STDR对AA大鼠足跖TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平的影响。2.1对AA大鼠足跖TNF-α表达水平的影响模型组大鼠足跖TNF-α表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖TNF-α表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。2.2对AA大鼠足跖IL-1β表达水平的影响模型组大鼠足跖IL-1β表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖IL-1β表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。2.3对AA大鼠足跖IL-6表达水平的影响模型组大鼠足跖IL-6表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖IL-6表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。3.STDR对AA大鼠脾脏TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平的影响。。3.1对AA大鼠脾脏TNF-α表达水平的影响模型组大鼠脾脏TNF-α表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖及脾脏TNF-α表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。3.2对AA大鼠脾脏IL-1β表达水平的影响模型组大鼠脾脏IL-1β表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖及脾脏IL-1β表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。3.3对AA大鼠脾脏IL-6表达水平的影响模型组大鼠脾脏IL-6表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),STDR各剂量组大鼠足跖及脾脏IL-6表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:STDR对AA大鼠足跖与脾脏中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达均有明显的抑制作用,是其治疗佐剂性关节炎的机制之一。