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近来,癌症的发病率越来越高,且患者呈年轻化的趋势。传统的治疗方式效率低,副作用大,不能满足治疗的需要。因此研发新的抗癌药物迫在眉睫。细菌因其独特的能力使其有望用于肿瘤治疗。由于大部分细菌本身的毒副作用大,且缺乏特异性和针对性,导致应用和临床研究方面受到限制。非致病性大肠杆菌Nisslel917 (O6:K5:H1)是一类安全性较高的兼性厌氧益生菌,对实体瘤具有较强的偏好性同时可在实体瘤内大量增殖。故本文尝试将其作为宿主菌构建成可表达抗肿瘤外源基因药物的工程菌,从而达到特异性的治疗癌症的目的。经研究发现天青蛋白具有抗肿瘤作用,其具体机制是它与肿瘤抑制蛋白p53形成复合物,从而稳定和提高p53蛋白在细胞内的水平,然后通过半胱氨酸蛋白酶介导的线粒体途径诱导细胞凋亡,从而达到抗肿瘤的效果。基于以上考虑,本研究克隆低氧启动子调控表达天青蛋白并融合果胶酶pe1B信号肽的基因,利用高效、便利的Red/ET同源重组将带有低氧启动子的天青蛋白基因插入到大肠杆菌Nissle1917的染色体上,获得了能稳定表达天青蛋白的工程茵大肠杆菌Nissle1917。抗肿瘤蛋白在发挥治疗作用时可能需要进入肿瘤细胞才能达到最佳疗效。但大肠杆菌Nissle1917没有侵袭特性,故将带有假结核耶尔森菌的侵染素基因inv基因和单核细胞增多性李斯特菌染色体上的溶血素基因hly的质粒pBlu-inv -hly-gfp电转到上述工程菌中,获得了相应的工程菌。该工程菌具有进入细胞的能力从而将抗肿瘤蛋白带进细胞中,提高了治疗效果。本文以大肠杆菌Nissle 1917为宿主菌成功构建了能稳定表达天青蛋白又具有侵袭性的大肠杆菌Nissle1917VB。实验结果表明工程菌具有一定的抗肿瘤效果,为进一步运用以大肠杆菌Nissle1917作为DNA疫苗或基因治疗的载体带来了希望。