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研究背景及目的:细胞因子信号抑制子SOCS1(Suppressor of cytokine signaling 1)是1997年发现的JAK-STAT通路中特异性负调控因子。研究发现,SOCS1主要通过三种途径对IFNs信号负向调节:与JAKs结合,抑制其激酶活性,抑制STAT1磷酸化,最终抑制JAK-STAT信号通路;通过SH2结构域与活化的JAKs,STATs结合,随之被蛋白酶体降解,从而发挥负向调节作用;SOCS1蛋白可以直接与IFNs受体结合,从而竞争结合受体酪氨酸磷酸化,抑制STATs磷酸化。目前,主要研究集中在SOCS1蛋白通过影响其他信号分子的活性而发挥其信号抑制的作用,而对其自身泛素化的调控及其抗病毒功能机制影响的研究尚未见报道。泛素化修饰是由泛素蛋白酶体系统(Ubiqutin-Proteasomesystem,UPS)精密调控的,其中去泛素化酶在UPS途径中起关键作用,成为目前国际泛素研究领域的前沿和热点。鉴定与疾病相关的重要蛋白的去泛素化酶,并寻找其小分子抑制剂,可能为以后临床靶向治疗相关疾病提供一定的科学依据。SOCS1作为一个IFNs负向调控因子,其泛素化调控和功能的研究尚浅。本课题通过探讨JOSD1调节IFNs信号中SOCS1的泛素化,旨在为临床靶向治疗病毒感染提供新的实验依据。研究方法:在HEK293T细胞中过表达Myc-SOCS1,利用免疫沉淀探究SOCS1的泛素化修饰及蛋白降解。利用去泛素化酶文库初步筛选SOCS1的去泛素化酶JOSD1,进一步利用Western blot技术和Real-time qPCR的技术从蛋白水平、相互作用、去泛素化水平、稳定性以及相关性方面鉴定SOCS1的去泛素化酶JOSD1。最后用免疫印迹和免疫荧光技术分析去泛素化酶JOSD1通过调控SOCS1蛋白水平对IFN介导的信号通路的影响。研究结果:1.SOCS1自身发生泛素化,并且主要发生K48位泛素化。2.利用DUB文库筛选出去泛素化酶JOSD1增加SOCS1蛋白水平。3.SOCS1与JOSD1相互作用。4.JOSD1调控SOCS1的泛素化水平。5.SOCS1的稳定性能够被JOSD1调节。6.在病毒刺激下,JOSD1与SOCS1蛋白水平具有相关性。7.SOCS1的去泛素化酶JOSD1抑制IFNα信号通路,从而负向调控其抗病毒功能。研究结论:JOSD1作为SOCS1的去泛素化酶,能够去SOCS1的泛素化水平稳定SOCS1的蛋白水平,从而抑制Ⅰ型IFN的信号通路,进一步抑制Ⅰ型IFN介导的抗病毒功能。