抗鸡大肠杆菌病单味中药筛选及其成分的研究

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鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠埃希氏菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的一种细菌性传染病,较常引起败血症、心包心肌炎、全眼球炎、关节炎、腹膜炎、输卵管炎和大肠杆菌肉芽肿等。不仅给养鸡业带来严重经济损失,还给人类健康带来潜在威胁。该病的防治受到细菌耐药性、混合感染、继发感染等多方面的困扰。近年来,中药治疗鸡大肠杆菌病成为研究热点,并取得一定成果,本文采用体内、外抑菌活性试验筛选具有抑菌活性的中药,并对抗鸡大肠杆菌有效中药五味子提取物进行了成分分析。本试验从2010-2013年山东17地区疑似发病鸡场进行病料收集、细菌分离鉴定共获得鸡源大肠杆菌83株,并对分离菌株进行血清型和耐药性检测,发现山东主要流行血清型为O24、O15、O18,分别占24.10%、14.46%和10.84%。药敏试验结果显示分离菌对9种常用抗生素氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、阿米卡星、头孢唑啉、头孢他啶、氧氟沙星、环丙沙星都有一定的耐药性,耐药率在32.53%-80.72%。本研究选择清热类、祛风类、润肺止咳类、凉血止血类和收涩药五类共42味中草药,乙醇、50%乙醇、蒸馏水依次超声提取,合并三次提取液,旋转蒸发至干,得中药提取干物质,以环丙沙星标准品作为对照药物进行体内、体外抑菌活性筛选。体外抑菌活性试验采用管碟法测定中药提取物的抑菌圈直径,结果显示夏枯草、黄芩、黄连、金银花、连翘、板蓝根、桔梗、百部、黄精、五味子、乌梅、石榴皮有体外抑菌活性,抑菌圈直径在6.05mm-27.70mm。体内抑菌试验采用本试验室分离的的编号为11-29鸡源大肠杆菌分离株作为攻毒菌株。结果显示五味子对人工感染鸡大肠杆菌病理模型有一定疗效,五味子治疗组的死亡率显著低于阳性对照组(p <0.05),有效率和体增重显著高于阳性对照组(p <0.05),试验证明中药五味子对人工感染鸡大肠杆菌具有显著的治疗效果。五味子治疗组与广谱抗菌药环丙沙星治疗组相比,死亡率、有效率和体增重无显著差异(p>0.05),表明中药五味子在防治鸡大肠杆菌病中与广谱抗菌药环丙沙星作用相当。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌4种标准菌株和环丙沙星耐药及敏感的大肠杆菌分离株为供试菌,以环丙沙星为对照药物,采用牛津杯法和试管双倍稀释法测定五味子提取物对供试菌株的抗菌活性。结果显示五味子提取物对所有供试菌都有明显的抑制作用。五味子提取物对环丙沙星耐药菌的抑制作用显著优于环丙沙星。试验采用HPLC法对五味子提取物进行成分分析,结果显示五味子提取物中有9种成分,在保留时间8.24min检测出的化学成分为五味子的标志性化学物质五味子醇甲,五味子提取物中五味子醇甲含量为3.42mg/g。
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