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一、维生素D干预后血清25(OH)D水平变化对哮喘小鼠YKL-40、气道炎症等的影响目的:观察不同剂量维生素D对哮喘小鼠血清25(OH)D水平的影响,以及对血Ig E、YKL-40浓度和支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数、YKL-40浓度以及肺组织病理变化的影响,探讨维生素D补充在哮喘小鼠模型中的作用和机制,以及发挥作用适宜的25(OH)D水平,了解YKL-40在哮喘中的作用。方法:选用健康雌性BALB/c小鼠60只,4~5周龄,随机分成6组,每组10只:正常对照组A组、哮喘对照组B组、哮喘+VD1000IU/kg C组、哮喘+VD2000IU/kg组D组、哮喘+VD3000IU/kg组E组、哮喘+VD4000IU/kg组F组。以卵清蛋白(OVA)致敏和激发的方法建立哮喘模型,于致敏前一周开始以灌胃的方式给小鼠补充维生素D,A组和B组以生理盐水(NS)作为对照,其余四组补充不同剂量维生素D,直至实验结束。ELISA法检测小鼠血清25(OH)D、血清Ig E、血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)YKL-40浓度,Wright-GMS染色法计数BALF嗜酸性粒细胞(EOS)比例,HE染色肺组织切片。结果:1)血清25(OH)D水平:A组(65.69±2.47)nmol/L、B组(46.11±3.87)nmol/L、C组(85.27±3.26)nmol/L、D组(103.02±4.55)nmol/L、E组(122.45±6.31)nmol/L、F组(137.46±2.89)nmol/L,随着补充量的升高,浓度逐渐升高,B组低于A组,各组之间比较均有统计学差异(P<0.05)。2)BALF及血清YKL-40浓度:除A组外,灌洗液、血清YKL-40浓度均以D组最低,有统计学差异(P<0.05);F组明显高于B组(P<0.05),差异有统计学意义;C组和E组比较无统计学差异(P>0.05)。灌洗液和血清YKL-40浓度进行组内比较,C组和D组无统计学差异(P>0.05),其余各组血清YKL-40浓度均低于灌洗液。3)Ig E浓度:在各哮喘组中,D组[(5.02±0.19)ng/m L]浓度最低,与其余各组包括正常对照组[(4.05±0.17)ng/m L]比较均有统计学差异(P<0.05),C组[(5.70±0.27)ng/m L]和E组[(5.79±0.24)ng/m L]、B组[(6.35±0.33)ng/m L]和F组[(6.43±0.40)ng/m L]经比较差别无意义(P>0.05)。4)细胞计数和EOS(%):D组细胞计数及EOS%明显低于其余各哮喘组(P<0.05),差异有统计学意义;F组细胞计数及EOS%明显高于B组(P<0.05),差异有统计学意义;C组和E组比较无统计学差异(P>0.05)。5)肺组织病理:A组小鼠管腔正常,未见明显炎症细胞。B组及F组的支气管黏膜皱襞明显增多,周围可见大量炎症细胞浸润,平滑肌和基底膜增厚,管腔狭窄,管腔内可见大量炎性分泌物,其中F组炎症细胞更明显。C组和E组的支气管出现轻度的痉挛收缩,上皮细胞及平滑肌轻度增生,基底膜稍增厚,支气管周围可见少量炎症细胞浸润,管腔内分泌物较少。D组支气管收缩不明显,上皮细胞和平滑肌增生亦不明显,管壁未见明显增厚,周围炎症细胞少,与A组比较略显增多。6)灌洗液YKL-40与EOS%水平正相关(r=0.910,P<0.01),灌洗液YKL-40与血清Ig E呈正相关(r=0.834,P<0.01),有统计学意义。结论:1)哮喘组小鼠血清25(OH)D水平低于正常对照组,随着维生素D补充的增加,血清25(OH)D水平可增高。2)YKL-40在哮喘的发病机制中可能起促进作用,YKL-40的水平可一定程度上反应哮喘的严重程度,且和Ig E、EOS%水平正相关。3)维生素D的补充对哮喘小鼠可产生双重作用,适量的维生素D补充(2000IU/kg)可改善小鼠肺部炎症,减少YKL-40、Ig E等的分泌,减轻嗜酸性粒细胞浸润,但过量则会加重炎症反应。4)在哮喘小鼠中,对免疫系统发挥作用适宜的血清25(OH)D水平可能在100nmol/L左右,若超过120-130nmol/L,可能会进一步加重气道炎症。5)维生素D可能直接或间接影响YKL-40分泌,YKL-40也可能影响维生素D的吸收及作用。二、不同日照时间对小鼠25(OH)D水平的影响目的:了解小鼠基础血清25(OH)D水平,观察不同日照时间对25(OH)D的影响,探讨维生素D不足的可能原因。方法:选用健康雌性BALB/c小鼠24只,4~5周龄,随机分成4组,每组6只:A组(正常对照组)、B组(日光照射<0.5h)、C组(0.5h<日光照射<1h)、D组(日光照射>1h),各组生长环境及饮食均无差异,将小鼠直接充分暴露于秋季太阳光照下相应时间,持续6周。ELISA法检测小鼠血清25(OH)D浓度。结果:各组小鼠的血清25(OH)D浓度为A组(65.37±2.80)nmol/L、B组(65.40±2.84)nmol/L、C组(67.59±1.93)nmol/L、D组(79.02±1.74)nmol/L,D组与其它三组之间差异均有统计学意义(P<0.01),A、B、C组两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1)目前维生素D缺乏普遍存在,且与哮喘的发病密切相关。2)关于维生素D的补充剂量及日照量需进一步研究。