人源化单克隆抗体广泛应用在传染病预防控制、癌症治疗等领域中。为得到人源化单克隆抗体，本研究探索了特异性抗体分泌B细胞永生化的方法及条件；建立了基于抗原标记的纳米磁珠分选特异性B细胞的方法，为筛选HIV-1/P24以及EV71/VP1人源化单克隆抗体奠定了基础。本研究包括以下几个方面：1)为筛选HIV-1/P24单克隆抗体，大量制备了P24抗原；为筛选EV71/VP1单克隆抗体，构建了原核表达质粒pTWIN1-VP1，并进行了初步表达鉴定工作。2)对收集到的手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease， HFMD）病人的全血进行淋巴细胞分离，得到外周血单个核细胞（Periphery Blood Mononuclear Cell，PBMC）。通过酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）、间接免疫荧光技术（Immunofluorescence Technique）等方法对EV71/VP1阳性样本进行抗体检测。3)摸索体外活化培养条件，促使细胞分泌抗体。对HFMD病人淋巴细胞进行复苏后通过添加EBV、CPG以及CyA等刺激细胞，使其体外永生化并分泌抗体。利用CD19磁珠对细胞进行分选，对分选所得的B细胞进行倍比稀释后利用ELISA方法进行抗体效价检测。4)通过比较使用不同介质对B细胞分选的效率，建立了特异性B细胞分选方法。利用树脂柱偶联抗原方法以及纳米磁珠偶联抗原方法进行细胞分选，直接筛选出能够分泌特异性抗体的B细胞，筛选得到的特异性B细胞进行倍比稀释后，直接应用PCR扩增出抗体的重、轻链，转染293T细胞后分泌抗体，得到人源化单克隆抗体。