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支气管哮喘是多种细胞和细胞成分参与的气道慢性炎症疾病。Th细胞通过释放多种细胞因子在整个炎症反应中起着至关重要的作用。目前,Th1/Th2失衡被认为是支气管哮喘主要的免疫学改变。CpG-ODN是一类含有非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸基序的寡聚核苷酸,具有较强的免疫调节作用。大量动物实验显示,小鼠在抗原致敏阶段或在抗原激发之前给予CpG-ODN治疗,能够有效的抑制体内Th1/Th2失衡,抑制变应原诱导的气道EOS炎症和气道高反应性。这提示CpG-DNA对预防小鼠哮喘模型的形成有一定的作用,为CpG-ODN能预防敏感个体接触过敏原时产生哮喘反应提供了理论依据。我们利用OVA致敏和激发BALB/c小鼠建立哮喘动物模型,第一次激发24小时后腹腔注射CpG-ODN,观察CpG-ODN在Th2优势应答已经建立的情况下,是否能够抑制哮喘小鼠体内的Th1/Th2失衡和气道内变态反应性炎症,评价其治疗支气管哮喘的潜在作用。实验方法:32只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘模型组、CpG-ODN治疗组和ODN对照组。哮喘模型组、CpG-ODN治疗组和ODN对照组于第0、7、14和21天每只小鼠分别腹腔注射200微升的致敏液(含100微克的OVA和2.25毫克的免疫佐剂氢氧化铝)致敏;随后分别于第26和31天以1%的OVA溶液雾化吸入。正常对照组用氢氧化铝腹腔注射和生理盐水雾化吸入。CpG-ODN治疗组第一次激发24小时后腹腔注射100ug CpG-ODN; ODN对照组腹腔注射100ug ODN;哮喘模型组和正常对照组腹腔注射100ul生理盐水。最后一次激发24小时后处死小鼠。1、气管插管,用生理盐水灌洗肺泡,收集BALF,4摄氏度下1000r/min离心10分钟。取上清液冻存于-80度冰箱,待行ELISA检测细胞因子浓度;沉渣用1mlHank′s液重悬,吸取100ul用细胞计数板行细胞记数,观察BALF中白细胞总数;另吸取细胞悬液200ul行细胞爬片,瑞氏染色,观察EOS百分比及EOS绝对值变化;取小鼠肺组织,固定后制备病理切片HE染色,观察小鼠气道内炎症变化。2、取小鼠脾脏,制备脾单个核细胞悬液,在24孔培养板中进行细胞培养,每孔加入200微克OVA抗原。48个小时后提取脾单个核细胞培养上清液,冻存于-80度冰箱,待行ELISA检测细胞因子浓度。3、应用ELISA技术检测BALF和脾单个核细胞培养上清液中Th2型细胞因子IL-4、IL-5及Th1型细胞因子IFN-γ浓度。实验结果:1、和正常对照组相比,哮喘模型组和ODN对照组小鼠小支气管、血管粘膜下和周围肺组织有显著的炎症细胞浸润;BALF中白细胞总数、EOS百分比及EOS绝对值显著增加。BALF中IL-4、I L-5水平升高,IFN-γ水平下降;脾细胞培养上清液IL-4水平升高,IFN-γ水平下降,反应了Th1/Th2失衡的存在。用OVA致敏和激发建立的小鼠哮喘模型具备了哮喘的一般病理生理特征,表明该模型建立成功。2、和哮喘组、ODN对照组相比,CpG-ODN治疗组BALF中白细胞总数、EOS百分比及EOS绝对值显著降低,支气管粘膜下EOS浸润明显减少,肺部炎症情况明显减轻,提示变态反应性炎症受到抑制;BALF中IL-4、IL-5水平下降,IFN-γ水平升高;脾细胞培养上清液IL-4水平下降,IFN-γ水平升高,提示CpG-ODN治疗组小鼠体内Th1/Th2失衡受到抑制。3、BALF中EOS绝对值和BALF中IL-5浓度正相关(r=0.865,p<0.01),提示IL-5可能是参与EOS聚集和活化的重要的细胞因子。结论:抗原激发24小时后,Th2优势应答已经建立的情况下,腹腔注射CpG-ODN,能抑制哮喘小鼠体内Th1/Th2失衡及气道内变态反应性炎症,显示了CpG-ODN治疗支气管哮喘的潜在作用。