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羊绒是世界享有盛誉的高档纺织原料,绒山羊业是内蒙古畜牧业的重要组成部分。绒山羊的羊毛是由初级毛囊产生,羊绒是由次级毛囊产生。本研究对课题组前期获得的转录组数据进行加权基因共表达网络(WGCNA)分析,筛选出内蒙古绒山羊皮肤毛囊发生发育hub基因WNT10A;通过生物信息学、实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告系统筛选鉴定了能够调控WNT10A的miRNA;利用实时荧光定量PCR和Western blot验证了在胎儿皮肤成纤维细胞和上皮细胞中miRNA对WNT10A的调控作用;采用CCK8法和Annexin V-FITC/PI法检测WNT10A对胎儿上皮细胞和成纤维细胞增殖凋亡的影响。主要结果如下:1.通过WGCNA分析共得到10个共表达模块(blue、black、green、turquoise、purple、red、brown、yellow、magenta 和 pink 模块),计算各模块特征值得到在内蒙古绒山羊胎儿期皮肤毛囊发生发育115d-135d异性高表达模块—blue模块,然后对blue模块的基因进行基因连通性的计算和模块基因相关性分析得到候选hub基因(584个),随后对584个候选hub基因进行GO和KEGG功能富集分析,发现WNT10A是内蒙古绒山羊皮肤毛囊发生发育成熟阶段hub基因。2.通过生物信息学和课题组前期获得的转录组数据筛选得到9个可能调控WNT10A 的miRNA。随后通过实时荧光定量 PCR 验证发现chi-miR-130b-3p、chi-miR-301a-3p 和 chi-miR-532-3p 在内蒙古绒山羊胎儿期七个时期的相对表达量与WNT10A的相对表达量呈现极强负相关,斯皮尔曼相关系数(Rs)分别为-0.82、-0.86和-0.84,初步判断chi-miR-130b-3p、chi-miR-301a-3p 和 chi-miR-532-3p 与WNT10A存在靶向关系。3.双荧光素酶报告系统显示chi-miR-301a-3p和chi-miR-532-3p不能下调WNT10A3’UTR野生型的表达,表明本次试验中 chi-miR-301a-3p和chi-miR-532-3p 和WNT10A无结合作用。chi-miR-130b-3p 成功下调WNT10A3’UTR野生型的表达,突变后下调作用消失,表明WNT10A是chi-miR-130b-3p 的靶基因。4.实时荧光定量PCR和Western blot研究表明在胎儿皮肤成纤维细胞和上皮细胞中,chi-miR-130b-3p、chi-miR-301a-3p 和 chi-miR-532-3p 在mRNA和蛋白水平上均可不同程度的调控WNT10A的表达。5.CCK8法和Annexin V-FITC/PI双染色法结果显示WNT10A可能促进胎儿上皮细胞和成纤维细胞的增殖以及抑制胎儿上皮细胞的凋亡。