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鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是引起鸡慢性呼吸道疾病的主要病原菌,给家禽产业造成巨大的经济损失。许多研究表明mi RNAs在疾病的发生发展中起关键作用。MG-HS是课题组从湖北分离得到的强毒株,感染鸡胚,通过高通量测序发现,MG-HS能够显著抑制gga-mi R-223的表达。因此,本研究以gga-mi R-223为对象,探究其在MG-HS感染中的作用及分子机制。主要研究结果如下:1.RT-q PCR检测MG-HS感染的鸡胚模型和DF-1细胞模型中gga-mi R-223的相对表达量,结果显示,鸡胚感染后第4d、6d、8d的肺组织及DF-1细胞中gga-mi R-223的表达量均显著低于正常组(p<0.05),与高通量测序结果一致。2.通过Target Scan和mi RDB在线软件预测靶基因,结合其功能分析,初步选择FOXO3为gga-mi R-223的靶基因。通过RNAhybrid软件发现gga-mi R-223与FOXO3 3’UTR严格碱基互补配对,且靶序列在不同物种间高度保守。双荧光素酶报告系统分析显示,细胞中过表达gga-mi R-223能显著抑制野生型靶基因FOXO33’UTR荧光素酶活性(p<0.05),但对突变载体的荧光素酶活性无影响;通过RT-q PCR及WB进一步验证显示,过表达gga-mi R-223能显著抑制DF-1细胞中FOXO3 m RNA及蛋白的相对表达量(p<0.05),而抑制gga-mi R-223能显著提高细胞中FOXO3 m RNA及蛋白的相对表达量(p<0.05),证实FOXO3是gga-mi R-223的直接靶基因,且为负调控关系。3.动物和细胞试验表明,MG-HS感染后第4d、6d、8d的鸡胚肺组织中FOXO3m RNA的相对表达量均显著高于正常组(p<0.05),MG-HS感染的DF-1细胞中FOXO3m RNA及蛋白的相对表达量均显著高于正常组(p<0.05),与gga-mi R-223的表达相反。进一步说明在MG-HS感染中,gga-mi R-223通过靶向FOXO3起作用。4.在MG-HS感染的DF-1细胞中,过表达或抑制gga-mi R-223,通过CCK8、流式细胞仪检测细胞增殖、周期和凋亡。结果表明,MG-HS感染能显著抑制DF-1细胞增殖,阻滞细胞周期进程,促进细胞凋亡(p<0.05)。超表达gga-mi R-223能显著促进MG-HS感染细胞的增殖,促进细胞周期进程,使大量G1期细胞进入S和G2期,显著抑制细胞凋亡,而抑制gga-mi R-223显著抑制感染细胞的增殖,上调G1期细胞的比例,促进细胞凋亡(p<0.05)。5.RT-q PCR检测显示,DF-1细胞中过表达gga-mi R-223能显著促进周期标记基因CDK1、CDK6和CCND1的表达(p<0.05),而显著抑制凋亡标记BIM、FASLG、TRAIL等的表达(p<0.05),而gga-mi R-223抑制后结果与过表达恰好相反。当DF-1细胞中敲低靶基因FOXO3时,上述周期基因及凋亡基因的表达与过表达gga-mi R-223的结果一致。揭示MG-HS诱导gga-mi R-223下调表达,通过靶向FOXO3,抑制周期基因CDK1、CDK6和CCND1的表达,促进凋亡基因BIM、FASLG、TRAIL的表达,从而抑制感染细胞的增殖,促进细胞的凋亡。