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植物在生长过程中需要从富含微生物的环境中获取全部营养物质,但它们却很少被感染。这是因为植物在长期进化过程中形成了各自特有的抗菌途径,例如,为了抵御病原微生物的感染,植物生成了多类具有抗菌作用的次生代谢产物或蛋白质。其中,抗菌蛋白在植物防御反应中扮演非常重要的角色。我们发现银杏具有很强的抗病能力,因此,本实验的目的旨在从银杏果仁中分离纯化出一种抗菌蛋白并对其性质进行研究,从而为克隆其基因和研究其抗菌机理奠定基础。 本实验以银杏果仁为研究材料,经磷酸缓冲液抽提,40%-80%(NH4)2SO4分级盐析、CM-52离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤等步骤分离纯化到一种抗菌蛋白。并对其分子量、等电点、氨基酸组成、抗菌活性、热稳定性等性质进行了分析,主要获得以下结果: 1、从150g银杏果仁中纯化到4.4mg抗菌蛋白。该蛋白在SDS-PAGE上显示单一条带,其表观分子量为13000Da。 2、该蛋白在等电聚焦电泳中显示单一条带,等电点为9.5,是一种碱性蛋白。 3、氨基酸组成分析表明,此蛋白富含精氨酸和丙氨酸,而缺少半胱氨酸。碱性氨基酸占22%,与等电聚焦所测定蛋白质等电点较高的结果相一致。氨基酸残基总数为101个。 4、纯化的蛋白对黄瓜镰刀孢菌(Fusarium oxysporum)、瓜类炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、小麦全蚀病菌(Caeumannomyces graminis)等真菌有很强的抑制作用,而且对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia Coli等细菌也有一定的抑制作用。 5、该蛋白具有较高的热稳定性,在90℃下处理30min,对供试的黄瓜镰刀孢菌仍保持很强的抑制作用。