柱花草(Stylosanthesspp.)是一种优良的热带豆科牧草。目前，柱花草己在我国华南热带、亚热带地区进行了大面积种植和推广。然而，柱花草炭疽病(Styloanthracnose)的发生和流行限制了柱花草的进一步利用。Mineirao柱花草是一种高度抗炭疽病的品种，已在巴西得到了大面积的推广种植，有关研究人员已经对Mineirao柱花草的抗病机理进行了初步研究，从中克隆出MSRA基因，但目前对Mineirao柱花草抗病机理尚不清楚。 利用植株叶片接种技术对抗病Mineriao、感病CIAT2312柱花草接种炭疽病病原菌，对叶片中的3种酶PAL、PPO、SOD的活性进行测定。结果表明，接种后两种柱花草种质3种酶活性均先升后降，抗病品种增加高于感病品种，这三种酶的活性与柱花草对炭疽病的抗性密切相关，通过检测酶活的变化可作为抗病性鉴别的一个指标。 本实验利用RT-PCR法结合RACE技术，从Mineirao柱花草中成功克隆出PAL基因全长cDNA序列，最大阅读框2154bp。 本研究通过对不同柱花草种质对炭疽病的抗性鉴定，在验证了PAL在Mineirao柱花草抗炭疽病方面起一定作用的基础上克隆出PAL基因，利用半定量RT-PCR检测该基因在两种柱花草中的差异性表达，分析表明，Mineirao表达量高于CIAT2312柱花草，推测出该基因与抗炭疽病有关。 在PAL基因的编码框以启始密码子ATG和终止密码子TAG为两端设计一对特异引物，分别在引物5’端引人XbaI和XmaI酶切位点，用来扩增PAL基因并与pCAMBIA2301-WCS构建表达载体pCAMBIA2301-PAL。