慢病毒介导RNA干扰抑制RRS1基因表达对胆管癌RBE细胞增殖的影响

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目的:本研究将探讨运用慢病毒介导RNAi干扰技术抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞表达后,能否在体外实验中对胆管癌RBE细胞增殖产生影响。材料与方法:1.第一步确定在胆管癌中RRS1基因是否异常表达,运用RT-PCR技术手段检测湖南省人民医院肝脏外二科2013年5月至2013年11月间10例手术切除的胆管癌与癌旁胆管组织标本RRS1mRNA基因水平的表达。2.第二步拟通过慢病毒载体介导RNA干扰技术,从转录水平沉默RRS1基因表达,RT-PCR技术检测抑制RRS 1后在胆管癌mRNA基因水平的表达;体外实验观察抑制RRS1基因后对胆管癌RBE细胞增殖的影响,初步探讨抑制RRS1基因表达后对胆管癌细胞增殖的影响。结果:1.在10例临床样本中,RT-PCR检测结果发现在胆管癌组织中的RRS1 mRNA基因表达水平较癌旁胆管组织明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示在胆管癌中RRS1基因表达上调。2.成功通过慢病毒介导RNA干扰技术阻断了转录后水平RRS1基因的表达,RT-PCR技术手段检测实验组(转染RRS1-shRNA组)与阴性对照组(转染shRNA慢病毒载体组)RRS1mRNA基因表达水平,结果表明抑制了RRS1表达的实验组其mRNA的相对表达量受到明显抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。评估其基因敲减效率为80.10%,提示RNA干扰RRS1基因效果显著。3.在体外实验中运用cellomics检测实验组和阴性对照组两组细胞生长计数并绘制其生长曲线,结果表明RNA干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中表达后,胆管癌RBE细胞的增殖能力受到了明显下降。结论:1.通过实时荧光定量PCR检测临床样本,其数据表明在胆管癌组织中的RRS1 mRNA表达水平较癌旁胆管组织显著增高,提示RRS1在胆管癌组织中表达上调。2.慢病毒RNAi干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中的表达后,胆管癌RBE细胞生长与增殖能力有明显下降,提示RRS1可能会促进胆管癌细胞的增殖能力。
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