硫辛酸合成酶是一种广泛存在于各种有机体中，它参与内源性硫辛酸的合成。硫辛酸是一个有效的线粒体抗氧化剂，对有机体的能量代谢和抗氧化起到重要的作用。目前，人们已经克隆了多种生物的硫辛酸合成酶基因，目前，关于硫辛酸生物学功能的研究已经有许多，但硫辛酸在哺乳动物代谢的相关方面的研究相对较少，而与硫辛酸合成酶相关的研究就更少，至今还没有与猪的硫辛酸合成酶基因相关的报道。为进一步研究猪Lias基因所编码蛋白质的生物学功能，本试验基于电子延伸序列，设计其克隆引物，利用RT-PCR方法成功克隆了猪Lias基因，并检测了该基因在猪各组织中的分布情况。为了获取Lias的蛋白质分子，本试验根据克隆序列合成一对表达引物，将猪Lias的ORF片段亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)中，经菌液PCR鉴定、双酶切鉴定、测序鉴定。将获得的重组质粒pET-28a（+）-Lias转化入大肠杆菌BL2l(DE3)感受态细胞，分别用不同终浓度的IPTG和不同的诱导表达时间进行诱导，以确定蛋白表达的最佳条件。在最佳诱导条件下经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳检测。以鼠抗6×His标签单克隆抗体和HRP标记的羊抗鼠IgG二抗对Lias蛋白进行免疫印迹检测。结果表明：1.猪Lias的克隆、序列分析与组织分布。克隆的猪Lias基因包含一个完整的开放阅读框架，长度为1119bp，编码由372个氨基酸组成的Lias蛋白，其中酸性氨基酸72个，碱性氨基酸65个，蛋白质分子量为：41.58KDa，等电点为：9.05。其氨基酸序列与小鼠、大鼠、人、牛同源性分别为91.5%、79.4%、89.4%、88.2%，Lias基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、空肠、直肠、回肠、脂肪、皮肤、肌肉中都有表达，Gel-Pro analyzer软件分析后，主要在肾脏和脂肪中含量最高，其次是直肠和回肠。2.猪pET-28a（+）-Lias重组蛋白的鉴定。确定猪Lias基因插入的位置、大小和读码框均正确，证实成功构建了原核表达载体，将其命名为pET-28a（+）-Lias。表达的融合蛋白分子量约为41.58kDa，且主要以包涵体形式存在。结果在目的条带所处位置(41.58kDa)出现一条印迹，且分子量大小与目的蛋白的相同，证实该蛋白为所需要的目的蛋白Lias。