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目的：建立家兔混合反流性食管炎模型；研究丁香降气方对酸和胆汁混合反流性食管炎LES钙通道的调控机制。
方法：1.将32只新西兰兔随机分为正常组、混合灌注4天组、混合灌注7天组、混合灌注10天组。通过酸和胆汁混合灌注制备家兔混合反流性食管炎模型,肉眼观察食管黏膜大体形态、光镜下观察食管病理形态、透射电镜观察食管肌细胞超微结构。2.新西兰兔48只,共取LES环行肌条84个,其中正常组(N=26)、模型组(N=30)、中药组(N=28)。分别用nifedipine阻断电压操纵性L型通道,U-73122抑制磷脂酶C、2-APB阻断IP3R从而阻断受体操纵性钙通道,TG抑制肌质网Ca2+-ATPase,观察各组LES环行肌张力变化。分别比较三组LES环行肌各通道阻断前后张力幅度的差异。
结果：动物模型实验结果：
1.肉眼大体形态观察：正常组家兔食管下段黏膜光滑,黏膜下无血管增生；模型组家兔食管下段存在不同程度黏膜粗糙、充血,黏膜下血管增生,见散在或广泛糜烂,并可见不同程度溃疡。三组模型家兔食管肉眼积分有非常显著性差异(P<0.01)。
2.光镜下食管病理形态观察：正常组家兔食管光镜下黏膜及肌层无病理改变。模型组家兔光镜下见不同程度鳞状上皮固缩脱落,固有层嗜酸性细胞、中性粒细胞浸润,黏膜下层内血管扩张、充血,并见不同程度的溃疡、组织坏死。食管肌层也可见不同程度炎性细胞浸润。三组模型家兔食管病理积分有显著性差异(P<0.05)。
3.电镜下食管肌细胞超微结构观察：正常组食管肌质网、线粒体未见肿胀及扩张,肌丝排列整齐。混合灌注4天模型组食管肌细胞内线粒体见轻度肿胀,周围肌质网轻微扩张；混合灌注7天模型组肌细胞内线粒体明显肿大,周围肌质网明显扩张,肌丝部分溶解减少。混合灌注10天模型组见更严重的肌细胞损伤。
张力测定结果：
1.电压操纵性钙通道阻断前后三组LES环行肌张力比较：1)电压操纵性钙通道阻断前三组LES环行肌张力比较：正常组、中药组LES环行肌钙释放相、内流相张力均高于模型组(P<0.05),而正常组与中药组LES环行肌钙释放相、内流相张力相比无显著性差异(P>0.05)。2)电压操纵性钙通道阻断后三组LES环行肌张力比较：正常组、中药组LES环行肌钙释放相、内流相张力均高于模型组(P<0.05),而正常组与中药组LES环行肌钙释放相、内流相张力相比无显著性差异(P>0.05)。
2.受体操纵性钙通道阻断前后三组LES环行肌张力比较：1)抑制PLC前后三组LES环行肌张力比较：①抑制PLC前三组LES环行肌张力比较：正常组LES环行肌钙释放相、内流相张力明显高于模型组(P<0.01),中药组LES环行肌钙释放相、内流相张力高于模型组(P<0.05),正常组LES环行肌钙释放相、内流相张力与中药组相比无显著性差异(P>0.05)。②抑制PLC后三组LES环行肌张力比较：钙释放相正常组张力明显高于模型组(P<0.01),中药组张力高于模型组(P<0.05),正常组与中药组张力相比无显著性差异(P>0.05);钙内流相正常组、中药组张力均高于模型组(P<0.05),正常组与中药组张力相比无显著性差异(P>0.05)。2)阻断IP3R前后三组LES环行肌张力比较：①阻断IP3R前三组LES环行肌张力比较：正常组、中药组LES环行肌钙释放相、内流相平均张力高于模型组,但三组间张力幅度无显著性差异(P>0.05)。②阻断IP3R后三组LES环行肌张力比较：正常组、中药组LES环行肌钙释放相、内流相平均张力高于模型组,但三组间张力幅度无显著性差异(P>0.05)。
3.肌质网Ca2+-ATPase抑制前后三组LES环行肌张力比较：1)肌质网Ca2+-ATPase抑制前三组LES环行肌张力比较：正常组LES环行肌钙释放相、内流相张力高于模型组(P<0.05);中药组LES环行肌钙释放相、内流相平均张力高于模型组,但两组之间没有显著性差异(P>0.05);正常组与中药组相比没有显著性差异(P>0.05)。2)肌质网Ca2+-ATPase抑制后三组LES环行肌张力比较：正常组LES环行肌钙释放相、内流相张力高于模型组(P<0.05);中药组LES环行肌钙释放相、内流相平均张力高于模型组,但两组之间没有显著性差异(P>0.05);正常组与中药组相比没有显著性差异(P>0.05)。
结论：1.通过0.1mol/L盐酸和5％猪胆汁混合灌注可以成功制备家兔酸和胆汁混合反流性食管炎动物模型。本项研究结果是一个创新模型,国内外尚未见文献报道。2.酸和胆汁混合反流性食管炎模型家兔LES环行肌张力下降,可能与电压操纵性钙通道、受体操纵性钙通道和肌质网Ca2+-ATPase功能障碍有关。3.电压操纵性钙通道、受体操纵性钙通道、肌质网Ca2+-ATPase参与了丁香降气方对LES环行肌张力的调控；增加LES环行肌张力可能是丁香降气方治疗酸和胆汁混合反流性食管炎的作用机制。