论文部分内容阅读
胚胎发育相关基因-1(embryonic develop-associated gene 1,EDAG-1)是我们实验室自行分离克隆的一种特异表达于造血组织和细胞的新基因。EDAG-1可通过激活NF-κB信号途径来调控血细胞包括血液肿瘤细胞的生物学行为。前期的研究发现:EDAG-1在胎肝、胎盘、骨髓中高表达,但在正常人的脑、心、肾、肝、肺、肌肉、扁桃体、成熟白细胞等多种组织中表达量极低或不表达;在正常外周血中不表达,而在多种白血病组织中高表达;EDAG-1在多种实体肿瘤组织中不表达,但我们发现该基因在甲状腺癌组织中高表达。但其在甲状腺癌组织中高表达的意义不清。本实验主要研究EDAG-1在甲状腺癌中的生物学功能。首先应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从白血病细胞株YAC-1中扩增到EDAG-1基因片段,构建重组真核表达载体pcDNA3.1 (+)-EDAG-1。鉴定证实pcDNA3.1(+)-EDAG-1真核表达载体构建成功。将重组真核表达载体和空载体分别转染到NIH3T3细胞和Ba/F3细胞中,应用软琼脂集落实验检测NIH3T3细胞转染前后的集落形成能力,以及细胞周期检测Ba/F3细胞不依赖IL-3抗凋亡能力及其发生的机制。结果显示过表达EDAG-1的NIH3T3细胞集落形成能力明显增高,而对照组不能形成集落。转染后Ba/F3细胞的不依赖IL-3抗凋亡能力明显提高。且在Ba/F3-EDAG细胞中,NF-κB的DNA结合活性明显高于对照细胞,而STAT3与STAT5的磷酸化未发生明显的变化。为了明确EDAG-1在甲状腺组织的表达的情况,我们运用Western blot和SP法检测手术切除临床确诊的甲状腺肿瘤和胃癌标本中EDAG-1蛋白的表达情况。结果显示EDAG-1在甲状腺癌、甲状腺瘤组织和SW579细胞中表达,而在良性甲状腺肿和胃癌中低表达或不表达。为进一步了解EDAG-1在甲状腺癌发生、发展中所起的作用。我们同时构建了EDAG-1反向真核表达载体构建,利用脂质体法将pcDNA3.1(+)-EDAG-1质粒、pcDNA3.1(+)质粒和pcDNA3.1 (+)-AS-EDAG-1质粒分别转染人甲状腺癌细胞株SW579,应用体外增殖实验、软琼脂集落实验、划痕实验、粘附实验分别检测EDAG-l对甲状腺癌细胞SW579的增殖力、运动力、粘附力影响。结果表明过表达EDAG-1可以明显增强细胞增殖力、运动和粘附能力。将EDAG-1基因特异性siRNA及随机片段转染进人甲状腺癌SW579细胞中,沉默SW579细胞中EDAG-1的表达。检测沉默、过表达以及空载体的三组细胞的增殖、粘附能力和裸鼠成瘤能力的变化。干扰后的细胞的增殖、粘附和裸鼠成瘤能力都较转染空载体细胞明显降低。实验结果进一步证实了EDAG-1在不同甲状腺组织中差异表达。在甲状腺癌组织中高表达的EDAG-1对甲状腺癌细胞增殖、粘附等能力有明显的增强作用。其机制需要进一步研究。