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目的:羟基脱氢酶（Hydroxysteroid dehydrogenases，HSDs）是一类类固醇激素合成酶，参与类固醇的生物合成和代谢。许多环境污染物能够直接抑制一种或多种HSDs，从而干扰内源性类固醇激素水平。本文旨在比较4种不同的全氟烷烃类化合物包括全氟辛基磺酸(PFOS)、全氟辛酸(PFOA)、全氟己基磺酸(PFHxS)和全氟丁基磺酸(PFBS)对人胎盘3β-羟基类固醇脱氢酶1(3β-HSD1)和人绒毛膜癌细胞JEG-33β-HSD1活性的抑制作用。 方法:(1)在pcDNA3.1上构建一个能够表达人3β-HSD1 cDNA的质粒。筛选出成功插入人3β-HSD1 cDNA的质粒转染至哺乳动物COS1细胞中。用之前培养的能够表达人3β-HSD1的哺乳动物COS1细胞制备微粒体，测定蛋白浓度，然后将蛋白浓度调整至2mg/ml备用。3β-HSD1活性检测体系:0.2μM孕烯醇酮和0.2mM NAD+溶于250μl含0.5％吐温-20 PBS的溶液。计算3β-HSD1活性的线性范围。用100μM的PFASs和20μg线粒体蛋白确定最大抑制浓度。之后检测上述条件下线性范围内3β-HSD1的反应速率用不同浓度的PFOS测定其IC50值。通过双倒数作图，用不同浓度的PFOS和孕烯醇酮(0.002～10μM)确定PFOS对孕烯醇酮的抑制模式，用不同浓度的PFOS和NAD+(0.002～10μM)确定PFOS对NAD+的抑制模式。JEG-3细胞培养于含有100μMPFASs的MEM培养基中。培养12h后，JEG-3细胞用于细胞毒性分析，培养液用于孕酮水平检测。培养液中孕酮浓度由放射性免疫法测定。 结果:3β-HSD1活性测定结果得出PFOS能够抑制人3β-HSD1活性，其半数抑制浓度为3.27±0.07μM，而PFOA、PFHx和PFBS在浓度高达100μM时并不能抑制人3β-HSD1活性。在JEG-3细胞系中，只有PFOS明显抑制JEG-3细胞分泌孕酮，并且该抑制作用呈剂量依赖性在孕烯醇酮产生过程中，PFOS竞争性抑制3β-HSD1活性，是NAD+的混合型抑制剂。 结论:本研究表明，PFOS是PFASs中唯一的能够有效抑制3β-HSD1酶活性的抑制剂，PFASs对3β-HSD1活性的抑制与PFASs本身的碳链长度有关，PFASs对人3β-HSD1活性抑制强度:PFOS＞PFOA=PFHxS=PFBS。在人绒癌细胞JEG-3中，PFOS明显抑制3β-HSD1的活性，导致JEG-3细胞孕酮分泌减少，IC50为3.27μM，当PFOS浓度为1μM时即可引起3β-HSD1活性抑制。 本研究显示，PFOS对人3β-HSD1活性的抑制模式为竞争性抑制。我们测定了在不同PFOS浓度、不同NAD+浓度下3β-HSD1活性，证明PFOS是NAD+的混合型抑制剂。