覆盆子糖蛋白的分离纯化与生物活性研究

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覆盆子为蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属(Rubus L.)植物华东覆盆子(Rubus chingii Hu)的果实,是一味传统补肾中药,药食两用,其未成熟果实入药,有益肾,固精缩尿之功效,用于肾虚遗尿,小便频数,阳萎早泄,遗精,滑精等症。目前国内外对覆盆子的研究主要集中在化学组成和药理活性方面,而对糖蛋白的研究还未见报道。本研究以覆盆子为原料,采用现代分析技术对覆盆子糖蛋白进行了提取和分离纯化,并对纯化组分进行了组成及结构结构测定,采用现代功能评价方法对覆盆子糖蛋白粗提物的体外抗氧化活性和对小鼠体内抗氧化活性进行了初步研究,试验主要结论如下:(1)采用水提醇沉法提取覆盆子糖蛋白,正交试验得出最佳提取条件为:提取温度50℃,料液比1:15,提取时间4h,提取2次,糖蛋白得率为7.526%。(2)经DEAE-52离子交换纤维素柱层析和SephadexG-100凝胶柱层析分离纯化得到五种覆盆子糖蛋白组分:RGP-2、RGP-3-a、RGP-3-b、RGP-4和RGP-5。经Sepharose CL-6B凝胶柱层析法和SDS-PAGE电泳法进行纯度鉴定,说明它们均为组成均一的覆盆子糖蛋白组分,分子量分别为54.5kD、77.5kD、50kD、32.1kD和30kD。(3)五种覆盆子糖蛋白RGP-2、RGP-3-a、RGP-3-b、RGP-4和RGP-5的糖含量分别为:79.39%、75.43%、80.45%、83.88%、62.35%;蛋白质含量分别为:17.35%、20.92%、16.78%、13.60%、35.5%。(4)覆盆子糖蛋白单糖组成分析及红外光谱分析表明:RGP-2主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、核糖、阿拉伯糖、木糖和果糖组成,其糖链中同时存在α-、β-糖苷键;RGP-3-a由主要由葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成,其糖链主要以β-糖苷键相连;RGP-3-b主要由葡萄糖、核糖、阿拉伯糖、木糖和半乳糖组成,可能含有少量硫酸基;RGP-4主要由葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖、核糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成,其糖链主要由β-糖苷键相连;RGP-5主要由葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖、核糖和木糖组成。五种糖蛋白分子都含有吡喃环。(5)氨基酸组成分析显示五种覆盆子糖蛋白几乎均含有人体所必需的各种氨基酸,在氨基酸种类上无差异。其中天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸含量均较高,构成植物糖蛋白O-糖肽键的丝氨酸、酪氨酸也较高。(6)体外抗氧化试验结果显示,覆盆子糖蛋白粗提物的总还原力和对羟基自由基、超氧阴离子自由基及有机自由基的清除能力随糖蛋白浓度的升高而增大,呈现明显的量效关系。(7)小鼠体内抗氧化活性试验结果表明,覆盆子糖蛋白粗提物可以显著提高受试小鼠血清、肝组织、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性,而显著降低这些组织中丙二醛(MDA)的含量。说明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化性。
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