漆酶(Laccase)属于酚氧化酶，是一种结合多个铜离子的蛋白质，可将酚类物质（如多巴胺）氧化成相应的醌，在昆虫的生长发育和变态过程中发挥着重要作用。漆酶主要参与昆虫表皮鞣化，促进表皮的硬化和暗化，这个过程对于昆虫的生长发育至关重要。直翅目昆虫飞蝗是重要的农业害虫，常暴发成灾，对农业生产构成严重威胁。目前，漆酶在分子水平上的研究主要集中在完全变态昆虫，而在不完全变态昆虫中尚未见报道。本文以飞蝗Locustamigratoria为研究对象，对漆酶基因（Laccase）进行了分子特性及功能研究，这对深入了解漆酶在飞蝗表皮形成过程中的作用提供了基础资料，丰富了目前昆虫漆酶的研究内容，同时为研发以该酶为靶标的新型飞蝗绿色防控新技术提供科学依据。本文主要研究内容有如下三个方面:　　一、飞蝗漆酶基因的克隆及序列分析　　基于飞蝗表达序列标签(Expressingsequencetag，ESTs)数据库，采用生物信息学方法获得2条漆酶ESTs，经比对确定其分别为Laccase1和Laccase2cDNA序列片段，分别将其命名为LmLac1和LmLac2。其中LmLac1的部分核苷酸序列长为757bp，编码252个氨基酸;LmLac2的部分核苷酸序列长为509bp，采用RACE技术克隆获得2026bpLmLac2cDNA序列，其中开放式阅读框(ORF)为1866bp，编码621个氨基酸，3非编码区(3-UTR)的长度为160bp。　　二、飞蝗漆酶基因在不同发育阶段及不同组织部位的mRNA表达分析　　采用qPCR技术对漆酶基因在不同龄期和不同组织部位的mRNA表达水平进行了分析。结果显示:LmLac1主要在中肠表达，而LmLac2在体表特异性表达;LmLac1在各个龄期都有表达，其中在卵期表达量最低，成虫期第5天表达量达到最高;LmLac2在5龄第一天不同时间段的表皮中(0h，2h，4h，8h，24h)都有表达，且随着体表暗化程度的加深，表达量呈上升趋势，之后，LmLac2在5龄每一天均有表达，虽然表达量最高的第1天是表达量最低的第5天的3.9倍，但统计学分析无显著性差异。　　三、飞蝗漆酶基因的功能研究　　采用RNAi技术研究飞蝗漆酶基因在生长发育过程中的功能。飞蝗4龄若虫注射dsRNA(dsLmLac1/dsLmLac2)后，检测到目标基因的表达均被有效沉默。dsLmLac1注射组与dsGFP注射组相比，体壁鞣化程度相同，且无致死现象;dsLmLac2注射组中，若虫蜕至下一龄期均出现体色变淡，虫体变软，活动能力下降等现象。为了进一步研究LmLac2基因沉默后是否对之后各发育龄期若虫的表皮鞣化都有影响，选取2龄第1天若虫注射dsRNA，之后取每一龄期的表皮做石蜡切片观察分析，发现dsLmLac2注射组的若虫在蜕至3龄和4龄后与对照组相比，其表皮明显变薄，但蜕至5龄的若虫表皮厚度与对照组无差异。这些结果表明，漆酶LmLac1不是表皮鞣化所必需的，而LmLac2对飞蝗表皮的硬化和暗化起着重要的作用。　　四、中华稻蝗几丁质合成酶1基因的mRNA表达及功能　　根据已知中华稻蝗几丁质合成酶1基因（OcCHS1）保守区域部分cDNA序列（GenBank登录号:HM214491），运用RT-PCR和qPCR技术分析mRNA表达特性，采用RNA干扰技术研究其生物学功能。结果表明，OcCHS1在中华稻蝗各龄期都有表达，其体表为高表达，其次是气管，其它组织部位表达量低。RNA干扰实验发现，4龄第4天若虫注射OcCHS1的双链RNA(dsRNA)后，与对照组相比，OcCHS1mRNA表达量被沉默了70.8％，稻蝗出现蜕皮延迟、不能完成蜕皮或腹部皱缩死亡等现象，注射dsOcCHS1组死亡率为85.2％，与对照组(7.4％)相比差异显著。这些结果表明:几丁质合成酶1主要参与体表和气管几丁质的合成，对中华稻蝗的生长发育具有重要作用，RNA干扰使该基因沉默后可导致虫体死亡。