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光学分析手段由于其响应速度快、干扰小、设计简单、易操作等优势被广泛应用于生命分析中。电致化学发光分析(ECL)及表面等离子体(SPR)暗场成像分析是光学检测中重要的检测手段。ECL无需激发光源,其光背景小、灵敏度较高、线性范围宽,并具有较好的重现性、可控性与选择性。SPR暗场成像具有高通量、高灵敏度、免标记、高时空分辨率等优势。本论文主要着眼于研究基于ECL与SPR暗场成像两种光学手段用于生物化学检测方面的应用。主要内容如下:1、基于g-C3N4纳米纤维的电致化学发光技术用于水样中Pb2+的检测构建g-C3N4纳米纤维(CNNFs)与Ru(phen)32+电致化学发光共振能量转移作用(ECL-RET)用于Pb2+的高灵敏度检测。通过简单的热水解法结合电解法合成具有较强ECL信号和较好稳定性的g-C3N4纳米纤维(CNNFs)。同时在电极上吸附碳纳米管和金纳米颗粒,不仅可以增强材料的ECL信号,也能提高光信号的稳定性。在电极上修饰Pb2+适配体(cDNA)互补的DNA形成双链结构,由于Ru(phen)32+能够嵌入在双链结构中,并与电极表面的CNNFs发生ECL-RET作用,进而增强ECL。当检测物Pb2+与电极上的cDNA形成四连体打开DNA的双链结构使得Ru(phen)32+从双链中释放出来后,ECL-RET作用阻断,体系的ECL信号衰减。因此可以通过ECL的强度变化对水样中Pb2+进行定量分析。此外,在体系中加入Exo I对Pb2+的适配体进行剪切循环放大降低检测限,达到0.04pM。这种简易的探针对于分析水样成分含量具有广泛的应用前景。2、SPR与暗场散射成像联用免标记的单分子microRNA杂交行为的研究通过自组装SPR与暗场散射成像联用,对金纳米颗粒进行实时的成像记录。在这个工作中,我们构建了一个基于光驱动的纳米振子用于免标记单分子microRNA杂交行为动力学研究的探针。我们在金膜表面修饰上纳米振子并与金球之间形成一定的间隙宽度,由于microRNA能够与金膜表面的互补DNA杂交形成刚性的双链结构,因而可以阻止金球的振动。同时,我们通过自组装SPR与散射成像联用实现了对间隙宽度变化的高灵敏实时监测。我们将microRNA解旋和杂交的状态与体系中纳米振子振幅联系起来。并总结出microRNA的杂交速度与三维空间扩散有关,反应的温度和浓度对杂交和解旋的频率有着重要的影响。此成像体系对后期单分子检测和纳米力学的研究有着十分重要的意义。