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目的： 糖基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰，主要有N-糖基化和O-糖基化两种，越来越多的证据表明糖基化修饰与肿瘤有着密切的关系。N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)是催化O-糖基化起始的糖基转移酶家族，国内外的研究表明，该家族与肿瘤的生物学功能密切相关。N-乙酰氨基半乳糖转移酶6(GALNT6)是该家族的成员之一，有研究发现它在乳腺癌中表达升高，而且本实验组的前期研究发现GALNT6与乳腺癌细胞的侵袭和转移存在一定关系。本实验利用低表达GALNT6的乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞研究GALNT6对乳腺癌细胞增殖、分化的影响，从而进一步了解N-乙酰氨基半乳糖转移酶6在乳腺癌发生发展中的作用。 方法： 1、利用RNA干扰技术，通过脂质体把pGPU6/GFP/Neo-GALNT6干扰质粒和pGPU6/GFP/Neo-shNC对照质粒转入乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞株，构建低表达GALNT6的乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231稳定细胞株。 2、荧光定量PCR和Western blot技术检测GALNT6以及与增殖、分化相关的细胞因子PCNA、ICAM-1、cyclinD1、bcl-2的基因或蛋白水平的表达情况。 3、通过CCK-8实验、平板克隆实验检测细胞增殖能力。 4、油红O染色检测细胞内脂质滴含量。 5、流式细胞分析仪检测细胞周期分布情况。 结果： 1、荧光定量PCR和Western blot对GALNT6基因和蛋白水平表达情况的检测显示相关质粒载体已成功转入乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231，并得到稳定表达的细胞株。 2、CCK-8实验结果显示低表达GALNT6的乳腺癌细胞的增殖能力降低。 3、平板克隆实验结果显示低表达GALNT6的乳腺癌细胞克隆形成率降低。 4、Western blot检测结果显示GALNT6低表达乳腺癌细胞PCNA表达降低。 5、细胞周期检测结果显示GALNT6低表达乳腺癌细胞S期和G2期细胞比例增加。 6、油红O染色结果显示GALNT6低表达乳腺癌细胞染色阳性率升高。 7、荧光定量PCR和Western blot检测结果显示GALNT6低表达乳腺癌细胞中ICAM-1表达升高， cyclinD1、bcl-2表达降低。 结论： 本实验成功构建了低表达GALNT6的乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231)模型;CCK-8实验和平板克隆实验以及PCNA蛋白表达结果显示GALNT6表达下调可以抑制肿瘤细胞增殖;流式细胞术检测结果表明下调GALNT6的表达阻滞了细胞周期;油红O染色结果显示干扰GALNT6的表达可以促进乳腺癌细胞的分化;乳腺癌细胞分化相关基因ICAM-1、cyclinD1和bcl-2的检测结果显示GALNT6表达下调促进乳腺癌细胞的分化。综合所有实验结果，GALNT6能促进乳腺癌细胞的增殖，抑制乳腺癌细胞的分化，进而促进乳腺癌的发生发展。