谷氨酸受体在成骨细胞力学信号转导中作用的研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:carol123450
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目的:研究骨髓间充质干细胞D1和成骨细胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14在基底应变作用下NMDA型谷氨酸受体(NMDAR)的表达情况,探讨NMDAR在成骨细胞力学信号转导的作用和相关的信号通路。方法:采用RT-PCR技术,免疫荧光染色技术,蛋白免疫印迹技术和体外细胞循环拉伸基底应变刺激的方法,鉴定在骨髓间充质干细胞D1和成骨细胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14细胞系中NMDAR的表达情况,研究MC3T3-E1 subclone 14细胞的力学响应;利用NMDAR非竞争性抑制剂MK801、细胞外钙离子内流信号阻断剂EGTA、细胞微丝骨架阻断剂细胞松弛素D单独应用和联合应用的方法,以RT-PCR、WESTERN-BLOT技术研究NMDAR参与力学信号转导的作用和相关的信号通路。结果:骨髓间充质干细胞D1和成骨细胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14三个细胞系均表达NMDAR必须亚基1(NR1)和不同的亚基2(NR2A-D);转录因子AP-1、CBFA1/RUNX2参与了力学信号转导的信号通路;阻断NMDAR,阻断细胞外钙离子内流,阻断细胞微丝骨架,都分别部分的抑制了力学刺激诱导的ERK1/2信号通路的激活,而分别联合应用MK801+EGTA、MK801+CYTO D阻断剂时则都基本抑制了力学刺激诱导的ERK1/2信号通路的激活。结论:NMDAR在成骨细胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14、骨髓间充质干细胞D1中表达,并在成骨细胞MC3T3-E1 subclone 14发挥功能,参与了成骨细胞的力学信号转导过程;NMDAR、细胞微丝骨架、细胞外钙离子内流耦联的信号通路参与了力学信号转导过程,并以共同作用的方式介导力学信号转导。
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