高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定糖类化合物研究

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糖是人体的主要能源物质,也是人体必需的营养素之一。食物中糖的种类和含量反映食物的质量和营养价值。近年发现,人体食用大量的蔗糖可能引起龋齿、肥胖症、糖尿病、冠心病等,许多发达国家与发展中国家在他们的“国民健康指南”中,无一例外地都劝告国民限制对糖的摄入,因此对于糖的准确定量也极为迫切。所以,为了医疗保健的特殊需要以及评价食物的经济价值,常需对食物中的糖进行含量测定。  本文建立了测定糖含量的方法—高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法;并对发芽小麦、几种果蔬的可溶性糖、几种食品中的单糖和双糖进行了测定分析。对南瓜多糖提取、分离纯化过程进行了系统的研究,并对得到的多糖的纯品进行了理化性质及单糖组成的分析。本研究为开发南瓜多糖提供了基础研究资料,将有助于南瓜多糖的深入研究。  1. HPLC-ELSD法测定发芽小麦中的单糖和双糖  应用HPLC-ELSD法测定发芽小麦中果糖、葡萄糖、蔗糖及麦芽糖的含量。样品经热水提取后,采用Kromasil NH2(250mm×4.6mm,5μm)柱分离,以乙腈-水(85:15, V/V)为流动相,使用ELSD检测。结果表明该方法具有灵敏度高,重现性、稳定性好,简便快速等优点,为测定发芽小麦中的单糖和双糖提供了准确、可靠的分析方法。  2. HPLC-ELSD法测定几种果蔬中的可溶性糖  应用HPLC-ELSD法测定分析果蔬中可溶性糖的含量,样品经热水提取(比较了热水提取和超声提取的效果,发现热水提取更好)后采用Kromasil NH2(250 mm×4.6 mm,5μm)柱分离,以乙腈-水(85:15, V/V)为流动相,使用ELSD检测,为测定果蔬中的可溶性糖提供了准确、可靠的分析方法。  3. HPLC-ELSD法测定几种食品中的单糖、双糖  应用 HPLC-ELSD法测定分析食品中单糖、双糖的含量。首先,样品用热水提取,其次,对不同样品怎么除杂进行了讨论,脂肪含量高的样品要除脂肪,蛋白质含量高的样品要除蛋白,碳酸饮料类要除气泡等,最后再将得到的样品溶液采用Kromasil NH2(250mm×4.6mm,5μm)柱分离,以乙腈-水(85:15,V/V)为流动相,使用ELSD检测,为测定大多数食品中的可溶性糖提供了准确、可靠的分析方法。  4.南瓜多糖的提取纯化及单糖组成分析  对南瓜多糖进行了初步的分离纯化及单糖组成分析。采用水提醇沉法得到南瓜多糖粗品;样品经Sevag法脱蛋白、除色素后上Toyopearl HW-55F凝胶柱,得到两个单一组分PP-I和PP-II。通过UV、IR等仪器及化学方法分析了其理化性质,水解产物用HPLC-ELSD法测定其单糖组成。实验表明,南瓜多糖PP-I是由鼠李糖、阿拉伯糖和葡萄糖构成,PP-II是由木糖和葡萄糖构成。
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