【摘 要】
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目的:1.制备肾阳虚型骨质疏松(osteoporosis,OP)模型鼠并予不同浓度加味阳和汤灌胃给药,检测大鼠骨密度(bone mineral density,BMD)、骨组织形态,探究加味阳和汤对其的治疗作用及量效关系。2.提取、培养并行成骨细胞鉴定,探究不同浓度加味阳和汤对成骨细胞的增殖矿化作用及量效关系。3.检测血钙、血磷、E2、ALP、β-catenin、LRP5、Runx2含量,探究加味
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目的:1.制备肾阳虚型骨质疏松(osteoporosis,OP)模型鼠并予不同浓度加味阳和汤灌胃给药,检测大鼠骨密度(bone mineral density,BMD)、骨组织形态,探究加味阳和汤对其的治疗作用及量效关系。2.提取、培养并行成骨细胞鉴定,探究不同浓度加味阳和汤对成骨细胞的增殖矿化作用及量效关系。3.检测血钙、血磷、E2、ALP、β-catenin、LRP5、Runx2含量,探究加味阳和汤对骨代谢的影响及其治疗机制的发挥与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法:研究一:选取60只雌性SD大鼠,每组10只随机分为空白组、模型组、加味阳和汤低剂量组、加味阳和汤中剂量组、加味阳和汤高剂量组、阳性药物组,除空白组外,其余各组均制作肾阳虚型OP模型鼠,分别予0.5%CMC-Na、加味阳和汤(0.5g/ml、1g/ml、2g/ml)、E2V(0.2mg/kg)灌胃给药2个月。观察各组大鼠一般情况,行大鼠体重量测定,处死大鼠后取左侧股骨测定BMD,右侧股骨病理染色切片观察骨组织形态,同时检测血钙、血磷、E2、ALP、β-catenin、LRP5、Runx2含量。研究二:选取16只新生SD乳鼠,每组4只随机分为空白组、加味阳和汤低剂量组、加味阳和汤中剂量组、加味阳和汤高剂量组,处死,培养及鉴定成骨细胞。取制备好的空白及不同浓度加味阳和汤含药血清干预成骨细胞,观察各组成骨细胞增殖矿化。结果:1.大鼠股骨BMD:与模型组比较,各给药组大鼠股骨BMD均有不同程度的上升,除加味阳和汤低剂量组无显著差异外(P>0.05),加味阳和汤中高剂量及阳性药物组均有显著差异(P<0.05)。2.骨病理染色切片:与模型组比较,加味阳和汤低剂量组骨显微结构无明显改善,加味阳和汤中高剂量骨小梁变粗,间隔减少,骨髓腔结构未见明显缺失,阳性药物组骨显微结构接近空白组OP大鼠,骨小梁丰富,连续。3.骨代谢相关指标检测:与模型组比较,血钙水平各给药组均显著上升(P<0.05);血磷水平加味阳和汤低中剂量组虽有一定程度上升,但无显著差异(P>0.05),加味阳和汤高剂量阳性药物组则显著上升(P<0.05);E2水平加味阳和汤低剂量组虽有一定程度上升,但无显著差异(P>0.05),加味阳和汤中高剂量组及阳性药物组则显著上升(P<0.05);ALP水平各给药组均显著下降(P<0.05)。4.血清β-catenin、LRP5、Runx2水平测定:与模型组比较,β-catenin水平各给药组均显著上升(P<0.05);LRP5水平加味阳和汤低剂量组虽有一定程度上升,但无显著差异(P>0.05),加味阳和汤中高剂量及阳性药物组则显著上升(P<0.05);Runx2水平加味阳和汤低剂量组虽有一定程度上升,但无显著差异(P>0.05),加味阳和汤中高剂量及阳性药物组则显著上升(P<0.05)。5.成骨细胞增殖:与空白组比较,各给药组成骨细胞生长速度均较快(P<0.05),其中高剂量组促增殖效果最佳,呈剂量依赖性。6.成骨细胞矿化:与空白组相比,各给药组均可促进成骨细胞钙盐沉积,促进矿化结节的形成,其中加味阳和汤低剂量组效果稍弱,高剂量组促进效果最佳,中剂量组促进效果居于两者之间。结论:1.观察大鼠一般情况,检测大鼠股骨BMD,观察骨显微结构,证明肾阳虚型OP模型鼠的制备成功。2.加味阳和汤可提高肾阳虚型OP模型鼠血钙、血磷、E2水平,降低ALP,影响大鼠骨代谢,促进钙盐沉积。3.加味阳和汤可提高大鼠血清β-catenin、LRP5、Runx2水平,激活Wnt/β-catenin信号通路。4.加味阳和汤可促进成骨细胞增殖矿化,对稳定骨代谢平衡具有重要意义。综述所述,加味阳和汤可通过提高BMD、改善骨显微结构、调节骨代谢来实现抗OP作用,且呈剂量依赖性,其作用的发挥与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。
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