论文部分内容阅读
目的：研究慢性重型乙型肝炎患者HBV BCP／前C区基因变异和机体Th1／Th2免疫状态，探讨HBV BCP／前C区基因变异与重型肝炎发生发展之间的关系及发病机制。方法：1．对38例慢性重型乙型肝炎和40例慢性乙型肝炎患者进行横断面研究。应用PCR法对患者血清标本进行HBV BCP／前C区核苷酸序列扩增及测序分析；同时采用双抗体夹心ELISA法检测患者及20例健康献血员血清IFN—γ、IL—2、IL—4和IL—10水平。2．对6例从慢性肝炎发展至重型肝炎的随访者进行前后对照研究。应用PCR法对患者在慢性肝炎及重型肝炎二个时期的血清标本进行HBV BCP／前C区核苷酸序列扩增并测序分析；同时应用双抗体夹心ELISA法检测患者血清IFN—γ、IL—2、IL—4和IL—10的水平。3．对1例肝移植患者在慢性肝炎、重型肝炎发生前、重型肝炎共三个时期的3份血清标本和肝移植时患者的肝组织标本进行HBV BCP／前C区的核苷酸序列PCR扩增，T克隆及测序分析；同时采用双抗体夹心ELISA法检测血清IFN—γ、IL—2、IL—4和IL—10水平，并对肝组织进行病理学、组织化学检测。结果：1．78份扩增的BCP／前C基因片段中69例发生了点突变，检出率前5位的突变位点是nt1764(48.7％)、1762(38.5％)、1896(26.9％)、1766(17.9％)、1862(14.1％)。慢性重型肝炎组BCP双突变(A1762T+G1764A)、G1896A、G1862T及联合变异(G1896A+BCP双突变)的发生率分别为42.1％、36.8％、21.1％和23.7％；慢性肝炎组BCP双突变、G1896A、G1862T及联合变异的发生率分别为15.0％、17.5％、7.5％、7.5％，二组间BCP双突变和联合变异的发生率差异有显著意义(P＜0.05)。慢性重型肝炎患者中HBeAg(—)组的BCP双突变、G1896A、G1862T和联合变异的发生率分别为64.7％、58.8％、35.3％和41.2％，HBeAg(+)组分别为23.8％、19.0％、9.5％、9.5％，其中二组间BCP双突变、G1896A和联合变异的差异有显著意义(P＜0.05)。6例随访者中，与慢性肝炎时期相比有5例患者在重型肝炎时期出现了新增的BCP／前C区常见变异，以A1762T／G1764A较常见。2．慢性重型肝炎组血清IFN—γ、IL—2水平高于慢性肝炎组，IL-4、IL—10水平低于慢性肝炎组(P＜0.05)。慢性重型乙型肝炎BCP／前C区变异组较未变异组血清HBeAg滴度明显下降(P＜0.01)，而血清IFN—γ、IL—2水平增高(P＜0.05)，血清IL—4、IL—10水平无差异(P＞0.05)；各变异组组间IFN—γ、IL—2、IL—4和IL—10水平比较无显著差异性(P＞0.05)。6例随访患者，重型肝炎时期IFN—γ高于慢性肝炎时期(P＜0.05)，IL—4、IL—10低于慢性肝炎时期(P＜0.05)。3．个案研究发现，慢性肝炎时期的血清中HBV BCP／前C区的变异以及准种相对较少，而重型肝炎发生前后血清中HBV BCP／前C区的变异明显增加，尤其是BCP双突变和G1896A的变异，重型肝炎的肝组织中HBV BCP／前C区的变异与血清类似，二者同时存在BCP区的缺失突变。残存的肝组织组织化学染色显示：HBV核心抗原的分布以胞浆为主。在病情进展期间，血清IFN—γ逐渐升高，IL-4和IL-10有所降低。结论：1．HBV BCP／前C区变异与慢性重型乙型肝炎有一定的相关性，其中以BCP区A1762T／G1764A双突变相关性较大。慢性HBV感染者在发生HBV BCP／前C区变异后有可能导致病情加重或重型肝炎发生，但两者之间的因果关系尚需进一步证实。2．慢性重型乙型肝炎存在一定程度Th1／Th2失平衡，以Th1型细胞因子占优势；HBV BCP／前C区变异可能通过影响HBeAg的合成和分泌，导致机体对HBV免疫状态改变，Th1型细胞因子增高，进而增强对肝细胞的损伤作用。本研究的意义：重型肝炎病情凶险，死亡率高，发病机理尚未阐明。本研究通过对慢性重型乙型肝炎患者HBV BCP／前C区基因变异状况以及患者体内主要的Th1／Th2细胞因子水平进行横断面和纵向前后对照研究，更充分的证实了HBV BCP／前C区基因变异与重型肝炎发生发展之间的相关性，进一步明确了一些较有临床意义的BCP／前C区变异，并探讨了相关变异在重型肝炎发病中可能的机制，为临床设计诊断性基因芯片提供了一定的参考，也为更好地进行重型肝炎防治提供了理论依据。