猪肾细胞(PK-15)对多种猪类病毒敏感,广泛应用于兽用疫苗的生产和研发。本文开发了适于PK-15细胞生长的廉价低血清培养基P-LSM(含3%新生牛血清),该培养基适于PK-15细胞静置培养和微载体悬浮培养,并且利于猪细小病毒的繁殖。本文开发了基于PK-15细胞低血清静置培养的猪细小病毒生产工艺,最大病毒滴度达到7.5Lg TCID50/ml。成功将此工艺从静置培养转移到微载体悬浮培养,并完成了1.5L和5L反应器上的验证实验,最大病毒滴度达到7.2Lg TCID50/ml。最大病毒滴度较生产企业增加了10倍。并首次发现了乳酸对葡萄糖得率与病毒滴度的正相关性,可作为指针病毒滴度以及收毒时间的重要参数。利用13C标记葡萄糖和谷氨酰胺的代谢流分析技术,本文就PK-15细胞的代谢和猪细小病毒接种PK-15细胞前后的细胞代谢变化进行了初步研究,并初步构建了PK-15细胞中心碳代谢的网络模型。研究发现在细胞延滞期,葡萄糖主要进行有氧糖酵解；指数生长期,部分葡萄糖开始通过丙酮酸脱氢酶经乙酰辅酶A进入TCA循环；进入稳定期后,部分葡萄糖开始通过丙酮酸羧化酶进入TCA循环；谷氨酰胺主要为TCA循环提供能量和中间代谢物。PK-15细胞接种病毒后,更多的葡萄糖通过磷酸戊糖途径、Ser-Gly途径和天冬氨酸,进入核苷酸合成；更多谷氨酰胺转化成天冬氨酸,合成核苷酸。