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妊娠期高血压疾病（Hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP）是女性怀孕期间一种病因尚不明确的特有的疾病,发病率约占全部妊娠的7%-15%,妊娠期高血压疾病是孕产妇死亡的第二大原因,其造成妊娠女性死亡比例约占妊娠相关死亡总数的10%16%,严重影响孕妇、产后妇女及新生儿的生命和健康。妊娠期高血压疾病主要发生在妊娠20周以后,收缩压≥140mmHg（1mmHg=0.133kPa）和（或）舒张压≥90mmHg,伴或不伴有蛋白尿及全身多器官损害,病情严重的患者甚至可以出现抽搐、昏迷、脑出血、心力衰竭、胎盘早剥及死亡。现在国内外根据发病基础、脏器损害程度将妊娠期高血压疾病分为五类,分别为妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期、妊娠合并慢性高血压、慢性高血压并发子痫前期。当今时代无创性产前诊疗技术迅速发展,大量新技术的开展应用,尤其是分子生物学技术和医学遗传学的发展,促使早期、快速、准确、无创伤的产前诊断技术不断提高,越来越多的疾病在胚胎发育的较早期,就能够安全、准确的诊断出来,越来越多的学者将研究重点转移至对妊娠期高血压疾病的早期无创产前诊断上来,结合分子生物学技术寻找早期HDCP的相关特异性分子是势在必行的趋势。早期一些研究认为肾上腺髓质素（Adrenomedullin）、妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）、胎盘蛋白13（PP-13）等诸多生物标记物可以预测女性在怀孕期间能否发展为妊娠高血压疾病。但是,上述生物标记物预测妊娠期高血压疾病发生发展的特异性及灵敏度不高,在临床的检查中不会将它们作为常规使用,导致妊娠期高血压疾病缺乏积极有效的防治措施。妊娠期高血压疾病引起孕产妇和围生儿发生高死亡率及高并发症,HDCP一直威胁着现代母婴的健康,寻找一种新型生物标志物用于预测HDCP的发生是临床实践工作中迫切需要解决的问题。研究显示,子痫前期公认的发病机制是通过异常的胎盘脉管系统和内皮细胞功能紊乱导致胎盘局部缺血。内皮祖细胞（EPCs）功能紊乱是发生子痫前期内皮细胞损失的基础,其中microRNA-126在内皮细胞中高表达,可以促进血管的新生,对维持血管的完整性和内皮细胞的稳态起着举足轻重的作用。microRNA-126能增强EPCs增殖、分化和迁移,microRNA-126是一种与血管生成密切相关的microRNA,已被证实在体外培养的内皮细胞和体内局部缺血诱导血管生成中,有潜在的血管生成作用。microRNA-126对促进血管生成和子痫前期胎盘血流灌注调控机制至关重要。本研究旨在探讨血浆microRNA-126在妊娠期高血压疾病孕妇与健康妊娠孕妇中表达的变化及其临床意义。研究目的:通过检测妊娠期高血压疾病各组患者血浆microRNA-126表达水平,比较妊娠期高血压疾病各组之间、妊娠期高血压疾病与正常妊娠对照组之间的表达差异,探讨妊娠期高血压疾病、健康妊娠患者血浆microRNA-126表达的变化及其临床意义。资料与方法1.临床资料入选2015年11月至2016年7月于我院产科住院的患者75例,并分为以下五组:（1）妊娠期高血压患者组（n=15;妊娠20周后血压≥140mmHg/90mmHg,于产后12周内血压恢复正常）;（2）轻度子痫前期患者组（n=15;妊娠20周后血压≥140mmHg/90mmHg伴蛋白尿≥0.3g/24h或随机尿蛋白+,于产后12周内血压恢复正常）;（3）重度子痫前期患者组（n=15;妊娠20周后血压≥160mmHg/110mmHg,蛋白尿≥2.0g或随机尿蛋白++,于产后12周内血压恢复正常）;（4）健康妊娠早期患者组（n=15）;（5）健康妊娠晚期患者组（n=15）。所收集的病例均为首次妊娠,临床诊断均符合第八版妇产科教材诊断标准。同时检查血压、24小时尿蛋白水平。2.排除标准无其他任何产科并发症和合并症;无近期用药史;无血液系统、肿瘤、自身免疫系统等疾病。3.方法HDCP患者分为妊娠期高血压组（A）、轻度子痫前期组（B）、重度子痫前期组（C）,健康妊娠患者分为健康妊娠早期组（NGT1）、健康妊娠晚期组（NGT2）,五组患者血浆micro RNA-126表达量可采用RT-PCR检测,并分析妊娠期高血压疾病与年龄、孕周、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、24小时尿蛋白的关系。3.1血浆分离和存储:入院后清晨空腹抽取静脉血10ml注入EDTA抗凝管,标本采集后1小时内以4℃,3000r/min,离心10分钟,将血浆提取后转移新的EP管,以4℃,16000xg/min,离心10分钟,转移新的EP管,如果同一天核酸纯化,储存在2-8℃,长时间存储,保持血浆冻结在-80℃。3.2提取血浆总RNA:统一采用QIAGEN公司miRNeasy Serum/Plasma Kit总RNA提取试剂盒操作,采用紫外分光光度法测定总RNA含量及纯度。3.3引物设计:根据GeneBank数据库中的相关序列设计microRNA-126的引物,以U6为参照基因,使用的引物序列如下:microRNA-126 RT Primer:ACACTCCAGCTGGGTCGTACCGTGAGTAATAA Forward Primer:TCGTACCGTGAGTAATAATGCG Reverse Primer:CGCATTATTACTCACGGTACU6的引物Forward Primer:CTCGCTTCGGCAGCACA Reverse Primer:AACGCTTCACGAATTTGCGT3.4 microRNA-126表达的检测:可采用茎环逆转录荧光定量PCR方法,以U6为内参。（1）逆转录反应,采用逆转录试剂盒（TAKARA公司Mir-X?miRNA First-Strand Synthesis）在普通PCR热循环仪（Eppendorf公司,德国）上进行,配成10μL的反应体系,反应条件:37℃,30min;75℃,5min;将逆转录产物（cDNA）进行下一步RT-PCR检测。（2）RT-PCR检测,使用RT-PCR试剂盒(TAKARA公司SYBR?Premix Ex TaqTMII Tli RNaseH Plus)在RT-PCR仪（Thermo公司,美国）进行,同时对每个c DNA样本检测3次,取其循环阈值（Ct值）3次的平均值,配成20μL的反应体系,PCR反应参数:95℃,30s;循环40次,95℃,5s;60℃,34s进行荧光检测。4.统计学处理应用SPSS 20.0软件进行统计学分析,计量资料以（x（10）s）表示,多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）,组间多重比较采用LSD法;real time-qPCR的结果分析,以U6为参照基因,采用2-△△Ct方法计算目的基因相对表达量,采用多元线性回归分析妊娠期高血压疾病的影响因素,P<0.05表示差异有统计学意义。结果1.一般临床资料比较五组患者在年龄分布、出生胎儿性别中之间比较,差异无统计学意义（P>0.05）;因健康妊娠早期组收集标本为妊娠13周以内,孕周与其它组无可比性;重度子痫前期组收缩压高于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、健康妊娠早及晚期组,健康妊娠早、晚期组收缩压均低于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组,差异均有统计学意义（P<0.05）;重度子痫前期组舒张压高于健康妊娠早、晚期组,健康妊娠早、晚期组舒张压均低于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组,差异均有统计学意义（P<0.05）;重度子痫前期组24小时尿蛋白高于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、健康妊娠早及晚期组,且差异有统计学意义（P<0.05）;2.妊娠期高血压疾病各组之间、妊娠期高血压疾病与正常妊娠对照组之间microRNA-126的表达差异情况与健康妊娠早期组相比,重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,有统计学差异（P<0.05）;与健康妊娠晚期组相比,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达上调,有统计学差异（P<0.05）;与轻度子痫前期组相比,重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,有统计学差异（P<0.05）;妊娠期高血压组患者血浆microRNA-126相对表达量为轻度子痫前期组、重度子痫前期组、健康妊娠早期组、健康妊娠晚期组分别是0.59、2.35、0.40、3.05倍;轻度子痫前期组患者血浆microRNA-126相对表达量为重度子痫前期组、健康妊娠早期组、健康妊娠晚期组分别是3.94、0.67、5.13倍;重度子痫前期组患者血浆microRNA-126相对表达量为健康妊娠早期组、健康妊娠晚期组分别是0.17、1.30倍;3.多元线性回归分析年龄、孕周、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、24小时尿蛋白是妊娠期高血压疾病的影响因素,影响从大到小依次为孕周、24小时尿蛋白、收缩压（SBP）、年龄、舒张压（DBP）。结论microRNA-126在妊娠期高血压疾病患者血浆表达下调,且在疾病组中重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达最低,提示血浆microRNA-126表达下调可能参与了妊娠期高血压疾病的发生和发展进程。多元线性回归分析示年龄、孕周、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、24小时尿蛋白是妊娠期高血压疾病的影响因素,影响从大到小依次为孕周、24小时尿蛋白、收缩压（SBP）、年龄、舒张压（DBP）。