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荜茇宁(Piperlonguminine, GBN)是蒙药荜茇的降血脂活性成分,为胡椒碱类衍生物,迄今尚无有效测定生物样品中GBN的方法。本研究工作以GBN为研究对象,建立了能够准确检测生物样品中GBN的新方法,并采用荧光光谱法、紫外吸收光谱法研究了GBN与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。这一工作对理解GBN在生物体内的代谢过程以及阐明GBN在体内的药理作用具有重要的理论意义。首先将稀土配合物偶氮胂Ⅲ-La (Ⅲ)作为光谱探针,在酸性条件下,以偶氮胂Ⅲ-La (Ⅲ)与GBN形成组成比为1：1：2配合物为基础,研究了GBN与偶氮胂Ⅲ-La (Ⅲ)作用的紫外-可见吸收光谱、共振瑞利散射光谱,分别建立了褪色分光光度法、共振瑞利散射法测定生物样品中GBN的新方法。方法的线性范围分别为0.02733～0.5466μg/mL、0.02733-5.466μg/mL,检出限为0.02206μg/mL、0.00859μg/mL。利用该体系对生物样品中的GBN进行测定,并与已有测定GBN的方法进行比较,发现在灵敏度、抗干扰性等方面均有提高。还根据GBN具有荧光特性且荧光强度可被表面活性剂吐温-20增敏的特性,建立了胶束增敏荧光法测定GBN,线性范围为0.02733-8.199μg/mL,检出限为0.001690μg/mL,可用于生物样品经适当分离后GBN的测定。在此基础上,采用同步荧光技术消除生物样品的背景荧光对GBN荧光光谱的干扰,建立了直接测定血清中GBN含量的新方法,线性范围为0.005466～3.2796μg/mL,检出限为0.001197μg/mL,可快速进行大鼠血清中GBN含量的直接荧光测定。拟定的荧光方法灵敏度高、选择性好,实际样品测定结果令人满意。在GBN与蛋白质相互作用方面,采用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法,在模拟生理环境条件下,分别研究了胡椒碱(Piperine, PP).姜黄素(Curcumin, Cur)与GBN之间的相互作用,探讨其对GBN与BSA作用的影响。结果表明,GBN、PP、Cur与BSA的相互作用过程均属于静态猝灭,结合常数Ka(BSA-GBN)<Ka(BSA-PP)、Ka(BSA-GBN)>Ka(BSA-Cur);计算不同温度下的结合参数、作用距离及相应热力学参数,推断其作用力类型分别为静电作用、疏水作用、疏水作用；标记竞争实验显示,与BSA的作用位点为site Ⅰ、site Ⅱ、site Ⅱ；紫外吸收光谱、同步荧光光谱显示GBN、PP、Cur改变了色氨酸残基周围的环境,对BSA构象产生了影响。多元配体的协同性作用分析表明,GBN、PP、Cur单独与BSA的结合作用是负协同性的；PP、Cur分别与GBN共存时,对GBN与BSA的相互结合无协同性作用,但是K(BSA-PP-GBN)>K(BSA-GBN)、K(BSA-Cur-GBN)> K(BSA-GBN)，表明三元体系中GBN与BSA的结合稳定性增加,PP、Cur对GBN与BSA结合的作用属于添加。三维荧光光谱的Stokes位移和荧光强度变化,进一步说明GBN与PP、Cur之间存在相互作用。