论文部分内容阅读
目的检测不同产地蜂胶的主要化学成分,比较其调节糖尿病大鼠体内糖代谢的作用,并检测其脂质代谢、能量代谢、氧化应激、糖代谢相关基因表达等指标,探讨其降血糖可能的机制。方法1.不同产地蜂胶的成分检测选择山东、北京、河南、江苏、杭州、巴西、新疆7种蜂胶。测定方法分别为:多酚,采用Folin-Ciocalteus法;黄酮,采用铝离子显色法;维生素C,采用2,4-二硝基苯肼比色法;氨基酸,采用柱后茚三酮法;肉桂酸,采用柱分配层析法;阿替匹林C,采用HPLC法;多糖,采用分光光度法;维生素B1、B2,采用荧光分光光度法;维生素E、对香豆素,采用液相色谱法;钙、铁、锌,采用原子分光光度法;硒,采用氢化物原子荧光光谱法。2.动物实验(1)巴西绿蜂胶对正常大鼠血糖及糖耐量的影响。正常雄性Wistar大鼠随机分为两组,分别灌胃植物油或0.17g/kg体重的巴西绿蜂胶。观察基本情况,干预0、15、30天,试剂盒测定血糖和糖耐量.(2)巴西绿蜂胶对糖尿病大鼠降糖作用的剂量效应分析。健康雄性Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型。按血糖水平随机分为4组,分别灌胃植物油或0.08g/kg、0.17g/kg、0.33g/kg体重的巴西绿蜂胶,观察基本情况,干预0、15、30天,试剂盒检测血糖和糖耐量,选择最佳剂量用于后续的试验。(3)四种蜂胶降糖作用比较。健康雄性Wistar大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型,按血糖水平随机分为5组,另设正常对照组。正常组和模型组灌胃植物油,实验组灌胃相应的蜂胶,干预0、15、30 天试剂盒测血糖和糖耐量,结束时,糖化血红蛋白和糖化血清蛋白含量、血清脂质水平、ATP含量、乳酸脱氢酶(Laetate dehydrogenase,LDH)、琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)、ATP酶活性、谷胱廿肽(Glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化氢酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px),超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)采用试剂盒测定;总抗氧化力,采用FRAP法;丙:醛(Malonaldehyde.MDA),采用TBA比色法;脂联素、过氧化物酶体增殖子激活受体(Proliferator-activated receptor,PPAR)γ、葡萄糖转运子(Glucose transporter,GLUT)4 mRNA 表达,采用实时定量PCR法测定,初步分析作用机制。结果1.不同产地蜂胶其成分差异很大。经过比较,活性成分含量较为丰富的是北京蜂胶、新疆蜂胶、山东蜂胶和巴西绿蜂胶,可以用于后续的比较研究。2.0.17 g/kg的剂量对正常大鼠的血糖、糖耐量均无影响。3.0.08 g/kg的巴西蜂胶能降低1型糖尿病大鼠空腹血糖和糖化血清蛋白与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。4.(1)四种蜂胶均能降低糖尿病大鼠的空腹血糖、糖化血红蛋白、糖化血清蛋白,但是蜂胶组之间差异不显著(P>0.05)。(2)糖尿病大鼠的总甘油三酯(Total triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-c)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、游离脂肪酸(Non-esterified fatty acid,NEFA)水平高于正常组,高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-c)低于正常组,差异有显著性(P<0.01),蜂胶组大鼠的脂质代谢紊乱有一定的缓解.(3)模型组大鼠肝脏和肌肉中LDH高于正常组,差异有显著性(P<0.01)。北京蜂胶和巴西绿蜂胶组的LDH活性恢复到正常水平。模型大鼠SDH活性以及肌肉中ATP酶的活性显著下降(P<0.05),山东蜂胶、新疆蜂胶能很好的改善肝脏和肌肉中SDH的活性,提高肝脏中ATP酶的活力(P<0.05);(4)糖尿病大鼠存在严重的氧化应激,四种蜂胶均能在一定程度上改善这种症状,增强机体的抗氧化力。(5)巴西绿蜂胶能够上调肌肉中PPARγ、GLUT4和脂肪中脂联素mRNA的表达,与模型组相比差异有显著性(P<0.05);(6)糖尿病大鼠的胰腺均有一定程度的损伤,巴西绿蜂胶、北京蜂胶和山东蜂胶都能在一定程度上修复其损伤。结论不同产地蜂胶中有效成分含量差异很大;蜂胶对正常大鼠血糖没有显著影响;四种蜂胶均能调节糖尿病大鼠体内的糖脂代谢,其机制可能与增强抗氧化能力、调节能量代谢相关酶的活性以及增加糖代谢相关基因的表达等方面有关。