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第一部分LRIG1通过EGFR信号通路抑制星形细胞瘤细胞增殖侵袭及其机制研究背景与目的：促进恶性星型细胞瘤发展及侵袭演进的分子机制仍不清楚。最近,在寻找内源性表皮生长因子受体的负调节蛋白中,我们克隆和定性LRIG1为一个抑癌基因。LRIG1在多种肿瘤中通常表达下调,包括胶质瘤。然而这种表达下调带来的生物学作用至今仍不清楚。本研究的目的旨在揭示LRIG1基因与人脑胶质瘤生长及侵袭的关系,并探讨内在的分子机制。方法：(第一部分)通过western blot,免疫组化检测临床各级别胶质瘤LRIG1表达,分析LRIG1蛋白表达差异与胶质瘤分级的关系。在人恶性胶质瘤细胞系U251中,利用转染短发夹RNA质粒干扰LRIG1表达,通过转染带有全长LRIG1序列的质粒过表达LRIG1,通过G418筛选得到稳定转染细胞株。通过MTT,软琼脂克隆, PCNA免疫组化,细胞周期检测及凋亡实验,裸鼠皮下成瘤实验,观察干扰及过表达LRIG1蛋白对U251细胞系增殖的影响。通过nocodazole药物将细胞同步化与G2-M期,正常培养,检测过表达LRIG1对动态细胞周期的影响。通过western blot检测相关细胞周期蛋白的表达。通过细胞侵袭及划痕实验,检测下调及过表达LRIG1对U251细胞侵袭性的影响。明胶酶谱实验检测基质金属蛋白激酶(MMPs)2,9活性,实时定量PCR实验检测MMP1,MMP2,MMP9表达差异。Western blot检测正常培养条件及EGF刺激条件下干扰及过表达LRIG1对EGFR及其下游信号通路MAPK-ERK及PI3K-AKT的影响,揭示正常培养条件下LRIG1对转录因子c-Myc表达的影响。结果：LRIG1表达与胶质瘤级别成负相关。在U251细胞中干扰LRIG1蛋白表达后,可以促进细胞增殖,过表达LRIG1蛋白后,则抑制细胞增殖。体内实验表明,过表达LRIG1后裸鼠皮下成瘤率下降,肿瘤直径减小。过表达LRIG1后通过调节时序性细胞周期蛋白D1,E延迟肿瘤细胞进入细胞周期。LRIG1通过抑制MMP2,MMP9的表达从而抑制细胞的侵袭。LRIG1抑制正常培养条件下EGFR,磷酸化EGFR,磷酸化ERK,磷酸化AKT蛋白的表达。但在EGF刺激条件下,相对于磷酸化ERK通路,LRIG1抑制PI3K-AKT信号通路更为明显。正常培养条件下,干扰LRIG1促进c-Myc的表达,而过表达LRIG1后抑制c-Myc的表达。结论：LRIG1可以抑制人胶质瘤细胞的增殖与侵袭。在胶质瘤中恢复LRIG1表达能提供一种新的胶质瘤治疗策略。第二部分LRIG1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定目的构建LRIG1基因慢病毒表达载体,转染细胞并检测其表达,为研究LRIG1的功能打下基础。方法zeroblunt-topo-LRIG1质粒上用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ双酶切下LRIG1基因全长序列,琼脂糖凝电泳,回收全长LRIG1片段。EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ双酶切慢病毒plvx-D sRedmonomer-n1载体,通过T4连接酶将全长LRIG1连接至双酶切后载体上。慢病毒包装系统,plvxDsRedmonomer-n1plvxDsRedmonomer-n1-3×flagLRIG1共转染293T细胞,病毒液感染细胞。荧光定量PCR和Western Blot检测LRIG1蛋白表达。结果对构建后的质粒通过双酶切及凝胶电泳,荧光定量PCR和Western Blot检测LRIG1基因成功表达。结论LRIG1基因慢病毒表达载体构建成功,病毒能感染细胞,外源基因获得稳定表达。