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神经干细胞分化、迁移调控机制的研究是揭示临床上常见中枢神经系统发育缺陷疾病致病机制的关键,同时也为一些神经退行性疾病和神经损伤的治疗提供新思路。近年来,越来越多lncRNAs被报道参与神经分化发育过程。长链非编码RNA Pnky是近两年Ramos,A.D.等人鉴定的一种长链非编码RNA,特异性的表达于人和鼠的神经细胞和组织中,并定位于细胞核内。已有研究表明Pnky参与调节神经干细胞的分化,然而Pnky是否参与调节神经干细胞的迁移作用目前尚不清楚。因此,本研究以长链非编码RNA Pnky为研究对象,探究其对神经干细胞C17.2和NE4C迁移的调节作用及其机制。为了初步探索Pnky对神经干细胞迁移的调节作用,我们首先在神经干细胞C17.2和NE4C中利用Pnky siRNA瞬时沉默Pnky表达,通过伤口愈合实验和Transwell实验检测其对C17.2和NE4C迁移能力的影响。数据显示,瞬时沉默Pnky可以抑制C17.2和NE4C的迁移。为了进一步确定这一发现,我们建立了C17.2和NE4C细胞Pnky敲低稳定细胞系和Pnky过表达稳定细胞系,并检测Pnky表达变化对其迁移的影响。结果表明,敲低Pnky确实可以显著抑制C17.2和NE4C的迁移,而稳定过表达Pnky则促进C17.2和NE4C的迁移。利用RT-qPCR及Western Blot方法检测Pnky敲低和过表达细胞系中迁移相关因子的表达,结果表明,Pnky敲低显著抑制MMP2、MMP9、Connexin43和Paxillin的表达,而Pnky过表达促进MMP2、MMP9、Connexin43和Paxillin的表达。MMP2和Paxillin等蛋白的表达可受到细胞内复杂信号网络的调控,使用Western blot方法检测Pnky瞬时敲低和过表达细胞系中参与调节神经干细胞迁移的信号通路蛋白,数据表明Pnky瞬时敲低抑制p38MAPK、ERK和PI3K-AKT信号通路,Pnky过表达激活p38MAPK、ERK和PI3K-AKT信号通路。为了明白Pnky是如何影响上述信号通路的,我们利用RAPID在线软件预测可能和Pnky存在相互结合的蛋白,分析提示Pnky可与多个核内蛋白相互作用,如U2AF1、Snrpa1、Alyref、Park7等。进一步分析其表达变化,数据显示Pnky表达水平的改变与U2AF1、Snrpa1和Alyref的表达变化呈正相关,而与Park7的表达无明显相关性。尽管一些RNA剪接因子能调节细胞迁移,RNA剪接因子U2AF1、Snrpa1和RNA运输因子ALyref是否能调节神经干细胞的调节有待于阐明。总之,本课题发现Ln RNA Pnky在神经干细胞迁移中起正调控作用,这种调节作用很可能通过激活p38MAPK,ERK和PIK3-AKT通路影响迁移相关因子的表达介导的。本课题的研究拓宽了人们对长链非编码Pnky功能的了解,为探索Pnky对神经干细胞迁移的调节机制奠定了基础,也为临床治疗神经退行性疾病和神经损伤提供新思路。