嗜酸性氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans,简称A.ferrooxidans)是一种极端嗜酸性化能自养型细菌,在生物冶金与环境保护中发挥着重要的作用。A.ferrooxidans具有两套能量代谢系统,既能以亚铁离子作为能源,也能氧化各种还原性硫化物。生物量是嗜酸性氧化亚铁硫杆菌基础学研究和应用中的一个重要参数。但A.ferrooxidans生长过程中独特的性质使该菌的细胞计数变得繁琐和困难。本文依赖于绝对荧光定量qPCR和改良的福林酚试剂法分别构建了亚铁能源下和硫粉能源下A.ferrooxidans细胞数和总蛋白之间的标准曲线,这样,定量细胞蛋白质后利用标准曲线,就可以快速地获得细胞数。同时作为标准曲线的应用之一,本文以比亚铁氧化速率作为评价不同嗜酸性氧化亚铁硫杆菌菌株间亚铁氧化能力的指标。A.ferrooxidans主要依赖于亚铁离子的生物氧化机制在生物浸矿中发挥重要作用。目前,主要依赖于生物信息学,蛋白质组学,荧光定量,膜分离等技术提出了很多亚铁代谢电子传递系统的模型,但是大多数缺乏直接实验数据支持。所以模型中的很多酶及发生的酶促反应还有待进一步的实验验证。本工作利用嗜酸性氧化亚铁硫杆菌无痕敲除方法对cyc1与cyc2基因进行了敲除,并构建了 cyc1与cyc2基因回补菌株,以野生型作为对照,对突变株和回补株在不同能源下的代谢和基因调控进行了研究,探索了cyc1与cyc2基因在A.ferrooxidans ATCC 23270亚铁代谢中的作用,为d.ferrooxidans ATCC 23270亚铁代谢途径的深入研究提供了参考。