研究报道,基因突变致mTOR信号通路过度活化所引起的一些综合征中往往伴随着难治性癫痫的发生,这类癫痫称为mTOR相关性癫痫。mTOR信号通路激活状态的高低反映癫痫发作的严重程度和抗癫痫药物的疗效。当mTOR上游信号如PI3K、蛋白激酶B（Akt）激活时,mTOR及其下游分子核糖体S6K蛋白激酶（p70S6K）被激活,活化的S6K进一步磷酸化S6并产生一系列生化效应。mTOR信号通路下游核糖体蛋白S6的磷酸化水平常被用作mTOR激活的标记物。已有实验方法检测脑组织磷酸化S6的表达水平,因此需要建立一种无创的方式准确反映脑内磷酸化S6的表达水平。本研究拟探讨癫痫后外周血和脑组织P-S6蛋白表达变化相关性及具体意义,寻找切实可行的mTOR信号通路表达状态的检测方法,有望提高mTOR相关性癫痫的诊断水平。第一章癫痫发作后外周血与脑组织中磷酸化S6蛋白含量变化的相关性研究及临床意义目的:明确癫痫发作后外周血与脑组织中核糖体磷酸化S6蛋白（P-S6）含量变化的相关性,并探究对外周血P-S6流式检测的灵敏度和临床意义。方法:建立P-S6蛋白的流式细胞术检测方法用以检测红藻氨酸致痫后小鼠及大鼠外周血中mTOR信号通路下游P-S6蛋白的变化,同时采用蛋白质印迹法检测其脑组织中P-S6的变化。采用Pearson相关性分析法分析脑组织和外周血中P-S6蛋白表达的相关性,并对大鼠外周血P-S6蛋白的表达与癫痫发作等级进行相关性分析。对KA致痫后小鼠外周血进行P-S6蛋白的流式细胞术检测和p70S6K激酶活性检测。使用优化的流式细胞术检测临床结节性硬化症（Tuberous sclerosis,TSC）患者外周血P-S6蛋白的表达水平。结果:癫痫小鼠脑组织P-S6的含量明显增高,外周血中P-S6表达也明显升高,与脑组织中P-S6蛋白表达具有一致性（r=0.8474,P<0.001）。大鼠自身致痫前后外周血中P-S6含量明显增加,与大鼠脑组织P-S6蛋白表达变化一致（r=0.9385,P<0.001）,且外周血P-S6含量的变化与癫痫发作等级呈相关性。相比p70S6K激酶活性检测,流式细胞术能检测致痫后外周血P-S6蛋白的动态变化。与健康者相比,TSC患者外周血P-S6表达明显升高,而雷帕霉素治疗的TSC患者没有明显表达升高,而对于TSC患者表达降低。结论:癫痫发作后外周血磷酸化S6蛋白变化与脑组织中的变化具有良好相关性,提示通过检测外周血P-S6的表达水平可准确反映脑组织中mTOR信号通路的变化。外周血P-S6蛋白的流式细胞术检测方法灵敏度高,TSC患者外周血P-S6蛋白表达水平能良好地反映癫痫发作情况。第二章癫痫发作后外周血与脑组织中磷酸化S6蛋白的意义目的:探讨癫痫发作后外周血和脑组织磷酸化S6蛋白变化的作用与意义。方法:整体水平上用已建立P-S6蛋白的流式细胞术检测致痫后小鼠外周血具体细胞群的P-S6蛋白表达,并检测致痫后不同时间点细胞群中P-S6的表达。ELISA检测致痫后脑组织和外周血不同时间点炎症因子的表达水平。免疫荧光检测脑组织海马区小胶质细胞的活化状态以及与P-S6蛋白的共定位现象。离体水平上在小鼠来源脑神经瘤细胞（mouse neuroblastoma cells,N2A）中敲除S6基因,检测KA给药后炎症因子的表达变化。结果:KA致痫后P-S6在外周血T淋巴细胞中表达增加。KA致痫后小鼠外周血T淋巴细胞中的P-S6于1h表达开始增加,6h时表达最高,外周血的炎症因子24h表达增高。KA致痫后小鼠脑海马组织中的P-S6于1h表达开始增加且表达最高,脑组织的炎症因子于24h或3d表达增高。致痫后1h脑海马组织CA3区P-S6表达增加,小胶质细胞开始出现活化,且在CA3区活化的小胶质细胞与P-S6蛋白于3h或6h存在共定位。N2A细胞敲降S6基因,降低了KA给药后引起的炎症因子的升高表达。结论:致痫后外周血T淋巴细胞的P-S6表达增加,促进外周血炎症因子的表达增加。KA致痫后小鼠脑海马组织中P-S6增加且在CA3区与活化的小胶质细胞存在共定位,其活化的小胶质细胞上的P-S6的表达升高促进脑组织炎症因子的表达。致痫后P-S6蛋白变化与炎症因子表达升高密切相关。