论文部分内容阅读
目的：通过整理前期基因芯片数据，分析Notch信号通路在肝内胆管细胞癌及非癌组织中的活化情况、进一步探讨 Notch1蛋白在肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810、RBE与正常肝内胆管上皮细胞株HIBEC中的表达情况，特异性设计合成Notch1-siRNA，干扰肝内胆管细胞癌细胞株中Notch1蛋白的表达，进而探讨Notch1基因对肝内胆管细胞癌生物学行为的影响及可能机制。 方法：⑴聚类分析前期基因芯片技术检测的4对肝内胆管细胞癌与非癌组织标本中Notch信号通路的活化水平，Western-blot检测肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810、RBE及肝内正常胆管上皮细胞株HIBEC中Notch1蛋白的表达情况。⑵运用CCK-8法检测siRNA-Notch1细胞与Negative control siRNA细胞在增殖方面的差异；运用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测其凋亡；运用TRANSWELL小室试验的方法检测上述两种细胞在侵袭转移上的差异。⑶运用Western-blot检测干扰后EMT相关蛋白的表达情况。 结果：肝内胆管细胞癌组织与非癌组织相比，Notch信号通路存在明显的活化。肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810和RBE内Notch1蛋白表达水平明显高于肝内正常胆管上皮细胞株 HIBEC。Notch1siRNA可下调肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810内Notch1mRNA的转录和Notch1蛋白的表达。下调Notch1蛋白在肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810内的表达水平可显著影响其增殖、凋亡和侵袭转移（p﹤0.05）。深入研究发现下调 Notch1蛋白在肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810内的表达水平对侵袭转移的影响可能与EMT相关。 结论：Notch1蛋白在肝内胆管细胞癌细胞株中有异常高表达；干扰沉默Notch1蛋白在肝内胆管细胞癌细胞株 HCCC-9810内的表达可抑制其细胞增殖、侵袭转移，同时促进其细胞凋亡；Notch信号通路促进细胞的侵袭转移可能与EMT相关。这提示 Notch信号通路对肝内胆管细胞癌的生物学行为具有重要影响，可能成为该病的新治疗靶点。