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前言幽门螺杆菌感染是胃癌发生的重要危险因素。目前认为蒙古沙土鼠是最理想的研究H.pylori致病作用的动物模型。辽宁庄河是我国北方胃癌高发区,流行病学调查资料显示当地H.pylori检出率高达79.3%,明显高于胃癌低发区,当地居民有食用咸猪肉的饮食习惯。本室前期从盐腌咸猪肉中培养出H.pylori。那么在高盐环境中生存的H.pylori生物学特性是否会发生改变,其致病作用是否发生变化目前还不清楚,其毒力如何,致病机制如何,尚不知晓。本研究利用从庄河胃癌高发区咸猪肉和人胃粘膜中培养出的H.pylori感染蒙古沙土鼠,观察咸猪肉源性H.pylori对蒙古沙土鼠胃粘膜上皮细胞的增殖作用,检测不同菌株感染蒙古沙土鼠后PCNA、cyclinD1、p21的表达情况,比较咸猪肉源性和人胃粘膜源性Hp对胃粘膜上皮细胞增殖作用的差异,以期进一步明确幽门螺杆菌的生物学特性、致病性及其机制。实验方法利用本室自行建立的咸猪肉源性H.pylori(X23)以及胃粘膜源性H.pylori(4854),在微需氧的条件下,进行复苏培养。经菌落特征、形态学染色、PCR、测序等鉴定方法证实该菌为H.pylori。经胃管灌饲蒙古沙土鼠H.pylori X23及4854,建立H.pylori感染的蒙古沙土鼠动物模型,观察咸猪肉源性和人胃粘膜源性H.pylori对蒙古沙土鼠胃粘膜上皮细胞的增殖作用,采用免疫组织化学技术,分别检测PCNA、cyclinD1及p21在蒙古沙土鼠胃粘膜上皮细胞中的表达,并采用统计软件SPSS11.5对数据进行统计学分析。结果一、H.pylori的培养与鉴定尿素酶试验见尿素酶半固体培养基呈红色,即为阳性。在光学显微镜下观察革兰氏染色呈红色,W-S染色见棕黑色或黑色的呈“S”型、弯曲状、海鸥状、杆状细菌者为H.pylori阳性。二、不同来源H.pylori在蒙古沙土鼠胃粘膜定植情况蒙古沙土鼠胃粘膜组织采用中性福尔马林溶液固定,制成石蜡切片,HE、W-S硝酸银染色证实灌饲H.pylori实验组胃粘膜组织有H.pylori定植,而对照组胃粘膜组织未见H.pylori定植。三、不同来源H.pylori感染蒙古沙土鼠胃粘膜形态学变化H.Pylori感染组在第13周解剖时仅X23组肉眼见到粘膜糜烂和出血,而4854组未见异常。第26和52周解剖时蒙古沙土鼠胃粘膜肉眼可见明显的出血,炎症及溃疡病变,其中溃疡多发生在胃窦部,溃疡呈圆形或卵圆形,边缘稍微凸起。正常对照组在整个实验过程中,均未见到有粘膜糜烂、出血和溃疡等改变。H.pylori感染蒙古沙土鼠13周后,X23组HE染色胃窦部粘膜下层及固有层可见大量淋巴滤泡,有浅表性胃炎的表现,4854组未见异常;感染26周X23组胃窦部有明显萎缩,4854组表现为浅表性胃炎;感染52周,X23组胃窦部表现为重度萎缩性胃炎伴异型增生,4854表现为浅表性胃炎和胃溃疡。正常对照组在整个实验过程中均未发现炎性细胞浸润、胃炎等病理改变。四、不同来源H.pylori感染蒙古沙土鼠胃粘膜PCNA、cyclinD1、p21表达情况PCNA标记的阳性细胞呈核着色,在正常胃窦粘膜,阳性细胞主要分布于粘膜固有层胃小凹区域的腺管上皮中,呈带状分布,形成细胞增殖带,表层上皮几乎不存在PCNA标记的阳性细胞,而H.Pylori感染后,PCNA标记的阳性细胞明显增多,与对照组相比,咸肉源性组和胃粘膜源性组PCNA表达显著提高(P＜0.05);咸肉源性组显著高于胃粘膜源性组(P＜0.05)。CyclinD1标记的阳性细胞主要呈核着色,胞浆亦有表达,阳性细胞主要分布于表层上皮,与对照组相比,咸肉源性组和胃粘膜源性组cyclinD1表达显著提高(P＜0.05);咸肉源性组显著高于胃粘膜源性组(P＜0.05)。P21标记的阳性细胞呈细胞浆着色,阳性细胞主要分布于基底层,表层上皮表达很少。与对照组相比,咸肉源性组和胃粘膜源性组p21表达显著降低(P＜0.05);咸肉源性组明显低于胃粘膜源性组(P＜0.05)。结论1、咸猪肉源性和人胃粘膜源性Hp均可引起蒙古沙土鼠胃粘膜上皮细胞PCNA表达增高,对蒙古沙土鼠胃粘膜上皮细胞有促进增殖作用。2、咸猪肉源性和人胃粘膜源性Hp促进蒙古沙土鼠胃粘膜上皮细胞增殖作用可能是因为上调cyclinD1和下调p21表达引起的。3、咸猪肉源性Hp促进增殖作用强于人胃粘膜源性Hp。