论文部分内容阅读
【目的】通过建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/CDDP,观察并分析其生物学特点,检测胃癌耐药细胞的相关特性、EMT相关表型,初步探讨EMT与胃癌多药耐药、转移的关系,为开发新的胃癌靶向治疗药物提供理论基础,从而为临床患者提供有效的治疗策略。【方法】1.选择人胃癌细胞系SGC7901为亲本细胞,以顺铂为诱导剂,其1/10的IC50为起始诱导浓度,采用浓度梯度递增法,历时12个月对亲本细胞SGC7901进行诱导,获得的人胃癌顺铂耐药细胞株命名为SGC7901/CDDP。2.倒置光学显微镜观察细胞形态特征;MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算群体倍增时间;平板克隆球形成实验比较耐药细胞的克隆形成能力;利用transwell小室作细胞迁移实验与重组基底膜侵袭实验评估细胞在体外迁移与侵袭能力。3.通过MTT比色法检测胃癌亲本细胞SGC7901与耐药细胞SGC7901/CDDP对于不同化疗药物的耐药指数及药物敏感性; Annexin V/PI染色法检测两种细胞株在顺铂作用下的凋亡情况;阿霉素潴留和蓄积试验比较两种细胞的耐药特性。4.利用Western blot检测亲本细胞SGC7901与耐药细胞SGC7901/CDDP中MRP、Bcl-2、Bax及EMT相关表型蛋白E-cadherin、vimentin等蛋白表达水平。【结果】1.成功构建了稳定的人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/CDDP。2.耐药细胞株SGC7901/CDDP呈梭形贴壁生长,细胞间隙增宽,获得了间质细胞形态特征,绘制细胞生长曲线得知耐药细胞的生长速度较亲本细胞减慢,但平板克隆形成能力及细胞的迁移与侵袭能力均明显增强(p<0.05)。3.SGC7901/CDDP对于其它作用机制不同的化疗药物如5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、丝裂霉素(MMC)、顺铂(CDDP)耐药指数也均明显增加,药物敏感性显着降低(p<0.05)。经顺铂处理48小时后显示耐药细胞的凋亡指数39.7%,较亲本细胞55.4%明显减少(p<0.05);阿霉素蓄积与潴留实验显示耐药细胞的药物泵出率显著增加(p<0.05)。4.耐药细胞株SGC7901/CDDP中, MRP、Bcl-2、 vimentin等蛋白表达显著增强,E-cadherin、 Bax等蛋白表达明显减弱。【结论】1.利用浓度梯度递增法诱导建立的人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/CDDP可为体外肿瘤研究提供很好的实验模型。2.人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/CDDP的耐药与MRP、 Bcl-2,bax表达变化有关,而且胃癌细胞在耐药形成过程中伴随EMT的发生,使胃癌耐药细胞获得了更强的侵袭与迁移能力,从而促进了胃癌的转移。