目的：通过观察电针及手针四关穴对慢性不可预见性温和刺激致郁大鼠行为学及脑内谷氨酸代谢功能的影响,对比两种针刺方法改善CUMS大鼠抑郁行为的效应差异,并探讨其内在机制。实验一 电针与手针四关穴改善CUMS大鼠行为的效应比较方法：1.动物分组雄性SD大鼠60只,体重220-270g,随机分为5组：空白组、模型组、电针组、手针组、药物组,每组12只。2.干预措施空白组3只/笼,正常饲养。模型组、电针组、手针组与药物组采用慢性不可预见性温和刺激联合孤养方法建立抑郁大鼠模型(选择7种不同温和刺激,每日施加一种刺激,连续施加35日)。行为学结果提示造模成功后开始治疗,治疗期间各组大鼠进行相同程度的捉抓与束缚。(1)模型组：建模成功后不予其他干预。(2)电针组：建模成功后第二日予电针四关穴,连续波,频率2Hz,留针30min,强度以见大鼠肢体微微颤抖而未嘶叫为度；治疗第一周每日一次,治疗第二、第三周每两日一次。(3)手针组：建模成功后第二日予针刺四关穴,施捻转行针法,平补平泻,每10min行针1次,每次捻转10s,留针30min；疗程同电针组。(4)药物组：造模成功第二日予利鲁唑灌胃治疗(4mg/kg, i.p),每12h灌胃一次,连续治疗3周。3.行为学评价指标在造模前、造模3周结束时及造模5周结束时对各组大鼠进行体质量、糖水偏好率、旷场实验及Morris水迷宫实验检测,以评价造模成功与否：在治疗1周结束时及治疗3周结束时对各组大鼠进行上述行为学检测,评价电针、手针与西药的治疗效应。4.统计分析采用SPSS20.0统计软件整理数据,计量资料采用均数±标准差表示；各行为学检测评分组间比较在重复测量方差分析基础上,进行正态性检验及方差齐性检验,符合正态分布及方差齐性检验则选用单因素方差分析,检验标准P<0.05。若不符合者则选用Kruskal-Wallis H秩和检验观察整体差异,进一步采用wilcoxon秩和检验两两比较,采用SPSS调整后显著性结果,检验标准P<0.05。实验室计量资料则根据正态性检验及方差齐性检验结果选用单因素方差分析或秩和检验。结果：1.电针、手针与利鲁唑对CUMS大鼠体质量的影响CUMS造模5周后,与空白组比较,各造模组体重显著下降(P<0.05)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组体重显著增加(P=0.022,P=0.004,P<0.001)；西药组与手针组疗效相当,电针组与西药组差异有统计学意义(P=0.019)。2.电针、手针与利鲁唑对CUMS大鼠糖水偏好的影响CUMS造模5周后,与空白组比较,各造模组糖水偏好率显著降低(P<0.05)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组糖水偏好率显著升高(均为P<0.001)；各组疗效比较无统计学差异(P>0.05)。3.电针、手针与利鲁唑对CUMS大鼠旷场实验评分的影响①水平活动：CUMS造模5周后,与空白组比较,各造模组水平活动显著减少(P<0.001)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组水平活动均有增加,手针与西药组有统计学差异(P=0.234,P=0.038,P=0.038)；手针组与西药组疗效相当(P>0.05)。②垂直活动：CUMS造模5周后,与空白组比较,各造模组垂直活动显著减少(P<0.05)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组垂直活动均有增加,手针组有统计学差异(P=0.58,P=0.035,P=0.177)。4.电针、手针与利鲁唑对CUMS大鼠Morris水迷宫评分的影响①潜伏期：CUMS造模5周后,与空白组比较,各造模组潜伏期明显高于空白组(P<0.05)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组潜伏期均有缩短,手针组、西药组有统计学差异(P=0.168,P=0.016,P=0.007)；手针组与西药组疗效比较无统计学差异(P>0.05)。②总距离：CUMS造模5周后,与空白组比较,各造模组移动总距离明显大于空白组(P<0.001)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组移动总距离均有缩短,电针组有统计学差异(P=0.015,P=0.079,P=0.123)。实验二电针与手针四关穴改善CUMS大鼠脑内As功能的效应比较方法：1.动物分组与处理同实验一2.评价指标采用Western blot技术与Q-PCR技术观察治疗结束时各组大鼠海马与前额叶皮层星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及其mRNA表达量的变化。3.数据处理与统计同实验一结果：1.海马脑区GFAP与GFAP mRNA表达量①GFAP含量：与空白组比较,模型组GFAP含量降低(P=0.002)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GFAP含量明显升高(P=0.003,P=0.007,P=0.003)；电针组、手针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。②GFAP mRNA表达量：与空白组比较,模型组GFAP mRNA表达量降低(P<0.001)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GFAP mRNA表达量明显升高(P=0.003,P=0.011,P=0.001)；电针组、手针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。2.前额叶皮层脑区GFAP与mRNA表达量①GFAP含量：与空白组比较,模型组GFAP含量降低(P=0.001)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GFAP含量明显升高(P=0.019,P=0.004,P=0.001)；电针组、手针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。②GFAP mRNA表达量：与空白组比较,模型组GFAP mRNA表达量降低(P=0.006)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GFAP mRNA表达量均有升高,电针组、西药组有统计学差异(P=0.016,P=0.061,P=0.017)；电针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。实验三电针与手针四关穴改善CUMS大鼠脑内GS功能的效应比较方法：1.动物分组与处理同实验一2.评价指标采用W estern blot技术与Q-PCR技术观察治疗后各组大鼠海马与前额叶皮层内谷氨酰胺酶(GS)及其mRNA表达量的变化。3.数据处理与统计同实验一结果：1.海马脑区GS及其mRNA表达量①GS含量：与空白组比较,模型组GS含量降低(P<0.001)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GS含量明显升高(均为P<0.001)；电针组、手针组与西药组比较无统计学差异(P<0.05)。②GS mRNA表达量：与空白组比较,模型组GS mRNA表达量降低(P=0.018)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GS mRNA表达量均有升高,电针组与西药组有统计学差异(P=0.019,P=0.036,P=0.007)；电针组、与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。2.前额叶皮层脑区GS及其mRNA表达量①GS含量：与空白组比较,模型组GS含量降低(P=0.002);与模型组比较,电针组、手针组与西药组GS含量明显升高(P=0.032,P=0.015,P=0.001)；电针组、手针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。②GS mRNA表达量：与空白组比较,模型组GS mRNA表达量降低(P=0.006)；与模型组比较,电针组、手针组与西药组GS mRNA表达量均有升高,电针组与西药组有统计学差异(P=0.018,P=0.015,P<0.001)；电针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。实验四基于1H-[13C]-NMR比较变电针与手针四关穴对CumS大鼠脑内谷氨酸代谢的影响方法：1.动物分组与处理同实验一2.评价指标采用1H-[13C]-NMR技术观察治疗后各组大鼠海马与前额叶皮层内经星形胶质细胞代谢产生的谷氨酸(Glu-C4)、谷氨酰胺(Gln-C4)及γ-氨基丁酸(GABA-C2)含量的变化。3.数据处理与统计同实验一结果(1)海马谷氨酸-C4、谷氨酰胺-C4及Y-氨基丁酸-C2的富集量谷氨酸-C4：CUMS造模5周后,与空白组比较,模型组富集量显著下降(P=0.034)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组富集量有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05)。谷氨酰胺-C4：CUMS造模5周后,与空白组比较,模型组富集量显著下降(P=0.034)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组富集量有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05)。Y-氨基丁酸-C2-CUMS造模5周后,与空白组比较,模型组富集量显著降低(P<0.001);治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组富集量明显上调(P=0.001,P<0.001)；手针组优于电针组,差异有统计学意义(P=0.015),与西药组疗效相当(P>0.05)。(2)前额叶皮层谷氨酸-C4、谷氨酰胺-C4及Y-氨基丁酸-C2的富集量谷氨酸-C4:CUMS造模5周后,与空白组比较,模型组富集量显著下降(P<0.001)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组富集量有显著回升(P=0.002,P=0.001, P=0.002),电针组、手针组与西药组比较无统计学差异(P>0.05)。谷氨酰胺-C4-CUMS造模5周后,与空白组比较,模型组富集量显著降低(P=0.001)；治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组富集量显著升高(P=0.019,P=0.007, P=0.001)；电针组、手针组与西药组比较无统计学差异P>0.05)。Y-氨基丁酸-C2:CUMS造模5周后,与空白组比较,模型组富集量显著降低(P=0.034);治疗3周后,与模型组比较,电针组、手针组与西药组差异无统计学意义(P>0.05)。结论：电针与手针四关穴可改善CUMS大鼠体重降低、糖水偏好率下降、活动能力减退等抑郁样行为,与利鲁唑相当；其中手针四关穴在改善自主活动及探索行为方面有优于电针与利鲁唑的趋势。电针与手针四关穴可提高CUMS大鼠海马及前额叶皮层的GFAP、GS、谷氨酸-C4、谷氨酰胺-C4及Y-氨基丁酸-C2的表达量；因此调控脑内谷氨酸的分解与代谢可能是其发挥抗抑郁效应的内在机制；其中手针四关穴在提高星形胶质细胞对谷氨酸代谢量方面有优于电针趋势,与利鲁唑类同。