糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）作为糖尿病的主要并发症之一,已成为危害人类生命健康的重大疾病,是导致终末期肾脏病的首要原因。糖尿病肾病会引起肾脏纤维化、水肿、高血压甚至会造成肾衰竭,严重者将会导致死亡。在糖尿病肾病的发病过程中会出现肾小管上皮细胞损伤并发生纤维化的现象,是糖尿病肾病纤维化的重要发病机制。上皮间充质转化（epithelial-mesenchyma1 transition,EMT）使上皮细胞失去极性,与基底膜连接消失,并获得较高的迁移能力,是肾小管间质纤维化的标志性过程。泛素化是细胞内信号传递的一个重要途径,主要有E1活化酶、E2结合酶和E3连接酶参与。K63泛素化主要发生在细胞内信号传导、DNA修复以及调控蛋白质的活性等过程中。文献报道UBE2V1作为唯一参与K63泛素化的E2酶参与了糖尿病肾病的发生,并发现UHRF2作为E3泛素连接酶也参与了 K63泛素化过程,但ube2v1参与糖尿病肾病的具体机制尚不清楚。目前针对uhrf2的研究主要集中在DNA甲基化过程以及肿瘤等领域,uhrf2与糖尿病肾病的关系尚未见报道。因此本课题主要以人胚肾小管上皮细胞（HKC）为研究对象,研究uhrf2和ube2vl在高糖诱导肾小管上皮细胞上皮间充质转化过程中的作用机制,并初步探讨两者在此过程中的关系,以期揭示糖尿病肾病纤维化的发病机制,为糖尿病肾病的治疗提供新的思路和靶点。主要研究结果如下:1.高糖促进HKC细胞的uhrf2表达,并导致细胞发生EMT转化。在高糖（D-葡萄糖30mmol/L）条件下培养肾小管上皮细胞-HKC 1小时后,uhrf2转录水平显著上调。免疫染色显示UHRF2主要定位于HKC细胞的细胞质中,经高糖处理后其定位没有发生明显改变。同时体外模拟EMT过程,划痕实验检测HKC细胞的迁移率,结果显示高糖培养或过表达uhrf2后引起细胞迁移速率增快,但敲低uhrf2后细胞迁移速率减慢。通过免疫染色和蛋白免疫印迹实验发现,HKC细胞在高糖培养条件下,能够促使EMT标志蛋白α-SMA、ZEB1表达量显著上调,E-cadherin表达量显著下调,但敲低uhrf2后能够抑制α-SMA、ZEB1上调,并减弱E-cadherin下调。结果表明:高糖培养HKC细胞能够引起uhrf2转录上调,uhrf2的上调能够进一步促进EMT过程的发生,从而加快糖尿病肾病纤维化过程。2.高糖促进HKC细胞的ube2v1表达,并导致细胞发生EMT转化。当高糖（D-葡萄糖30mmol/L）处理HKC细胞时,ube2v1的表达水平在1h时显著上调。同时体外模拟EMT过程,划痕实验检测HKC细胞的迁移速率,结果显示高糖处理或过表达ube2v1可以使细胞的迁移速率加快,但敲低ube2v1后细胞的迁移速率减慢。此外,免疫染色和蛋白免疫印迹实验发现,HKC细胞在高糖培养条件下,能够促使EMT标志蛋白α-SMA、ZEB1表达量显著上调,E-cadherin显著下调,但敲低ube2v1后能够抑制α-SMA、ZEB1上调,并减弱E-cadherin表达量下调。结果表明:高糖培养HKC细胞能够引起ube2v1转录上调,ube2v1的上调能够进一步促进EMT过程的发生,从而加快糖尿病肾病纤维化过程。3.uhrf2与ube2v1可能通过协同作用参与HKC细胞的EMT转化过程。通过实时荧光定量PCR发现,敲低ube2v1时uhrf2表达量显著降低,而当敲低uhrf2时,ube2v1的表达没有显著变化。免疫荧光实验表明当敲低ube2v1时UHRF2仍然定位于细胞质中。此外免疫沉淀实验发现高糖会使HKC细胞中蛋白的K63泛素化水平增高,并且UHRF2在高糖环境下会发生K63泛素化。结果表明:ube2v1介导高糖培养下HKC细胞的uhrf2转录上调,并可能促进UHRF2的K63泛素化从而共同参与HKC细胞的EMT转化过程,从而加快糖尿病肾病的纤维化进程,但具体机制有待进一步研究。综上实验结果表明,uhrf2和ube2v1均参与高糖环境下HKC细胞EMT过程的发生,并且两者可能通过协同作用参与此过程,从而促进糖尿病肾病纤维化的发生,为糖尿病肾病的治疗提供新的思路和靶点。