胆固醇酯酶（CHE:EC3.1.1.13）是一种重要的甾体酯酶,在食品、医药、造纸等方面有着广泛的用途。本研究的目的为医药与工业提供合适的酶源,主要开展了如下一些工作:胆固醇酯酶高产菌株的筛选、鉴定,高产菌株的生长与产酶发酵条件研究,胆固醇酯酶的分离纯化与鉴定,胆固醇酯酶的酶学特性研究等。经过筛选,从大型肉食动物肠道筛选出9株胆固醇酯酶高产菌株,其中1株表现出高于其他菌株的产酶能力,命名为CHE4-1。经形态及生理生化鉴定、16SrDNA（GenBank登录ID号:FJ649602）分析,CHE4-1鉴定为Acinetobacter sp.。迄今为止,未见不动杆菌属（Acinetobacter）产胆固醇酯酶的报道。对该菌株的生长与产酶条件进行了研究,提出了分段控制的发酵策略。产酶条件优化研究表明,其最适培养基为:胆固醇油酸酯0.2%,用0.15%TritonX-100助溶,蛋白胨0.05%,NaNO₃ 0.008%,硼酸0.0075%,CaCl₂ 0.03%,MgSO₄.7H₂O0.0125%,FeSO₄.7H₂O 0.0005%,KH₂PO₄ 0.037%;其最适培养条件为:起始pH6.9,250ml发酵瓶最佳装液量为35ml,30℃,发酵时间48h;酶活力达到950U/L。发酵上清液经超滤浓缩,DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenyl-SepharoseCL-4B疏水层析和Superdex-50凝胶层析分离纯化获得胆固醇酯酶。纯化后的胆固醇酯酶比活力为7.15U/mg,纯化收率为27.02%,纯化倍数为9.67倍。纯化后的胆固醇酯酶经HPLC纯度检测达98.22%,SDS-PAGE为单一条带。SDS-PAGE和Superdex-75凝胶层析分析显示为约6.5kDa的单链蛋白,是目前为止所发现的最小的胆固醇酯酶。酶学特性研究表明,该胆固醇酯酶的pH稳定范围为4-10;最适pH和最适温度分别为pH7.0和45℃,该酶催化胆固醇亚油酸酯、胆固醇油酸酯的米氏常数Km分别为1.75×10^-3mol/L、5.36×10^-4mol/L。该酶对长链和短链胆固醇酯均具有较高的催化活力。研究表明,大多数金属离子对胆固醇酯酶抑制作用不明显;Ca²⁺、Zn²⁺、硼酸对胆固醇酯酶有微弱激活作用;Cu²⁺、Triton X-100对胆固醇酯酶不具明显作用,显示了良好的临床应用价值。