西瓜嗜酸菌致病相关基因的筛选及功能分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:Whoafraidwh0
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瓜类细菌性果斑病(bacterial fruit blotch,简称BFB),主要危害西瓜、甜瓜,引起叶斑或叶枯,造成果实腐烂,导致大量减产,严重时甚至绝收;其病原为西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli),被国际规定为检疫性有害生物之一。然而,目前对此病菌致病机制的探究相对来说较少,因此本研究的主要目标是找出以及克隆致病相关基因,并对其功能进行分析。从本实验室构建的西瓜嗜酸菌突变体文库中活化出1468株突变体作为出发菌,经过两轮的西瓜果实致病性测定,获得了215株致病性丧失或明显下降的突变体;对1468株突变体进行观察,发现131株突变体颜色发生了变化,160株突变体形态发生改变。在西瓜果实上致病性丧失的127株突变体中,83.5%的突变体颜色发生改变,85.8%的突变体形态发生了变化,然而致病性显著下降的88株突变体与其颜色和形态没有明显的相关性。对致病力丧失或显著减弱以及颜色和(或)形态有变化的50株突变体进行甜瓜浸种试验,从中挑出16株致病力丧失或减弱的突变体进行西瓜摩擦接种试验,筛选出11株突变体进行亚克隆,得到了9个相关基因。利用三亲杂交的方法,构建其中5个突变体的互补菌株,这些突变体被插入的基因分别为:1transcriptional regulator AraC family, HrpB; hypothetical protein; DNA-3-methyladenine glycosylase I; L-threonine aldolase; pilus retraction ATPase. PilT。将野生菌A13和3号,5株突变体(195、462、944、X484、X522)以及5株互补菌株(195hb、462hb、944hb、X484hb、X522hb)的过敏性反应、致病性、形态特征、颜色显示、生长能力、群体感应信号、生物膜等进行研究,结果发现互补菌株195hb基本恢复了过敏反应、致病能力以及生物膜形成能力;菌株944hb恢复了游动能力;菌株X522hb部分恢复了致病能力;其余互补菌株(462hb、 944hb、X484hb)致病性等表型均没有恢复,因此表明了HrpB和PUT基因是与西瓜嗜酸菌致病相关的基因。
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